III 1st Strand cDNA Synthesis Kit 反轉(zhuǎn)錄
Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（With dsDNase）采用第三代高效逆轉(zhuǎn)錄酶蓬勃發展，具有更強(qiáng)的延伸能力和穩(wěn)定性規則製定，并配備了具有DNA分解活性的特殊dsDNase的必然要求，只需一步操作實現， 即可同時(shí)完成基因組清除與逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)傳承，操作方便快捷III 1st Strand cDNA Synthesis Kit 反轉(zhuǎn)錄
Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（With dsDNase）（for PCR or qPCR）
III 1st Strand cDNA Synthesis Kit 反轉(zhuǎn)錄
目錄號(hào)：71118
產(chǎn)品內(nèi)容
Components | 71118-50 50 rxns (20 μl/rxn) | 71118-100 100 rxns (20 μl/rxn) |
5x TRUE Reaction Mix | 200 μl | 400 μl |
dsDNase | 50 μl | 100 μl |
Oligo(dT)18 (0.5 μg /μl) | 50 μl | 100 μl |
Random primer (N6) | 50 μl | 100 μ |
RNase free H2O | 1.5 m | 1.5 ml |
保存條件：-20℃保存表現明顯更佳，有效期 12 個(gè)月狀態。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（With dsDNase）采用第三代高效逆轉(zhuǎn)錄酶，具有更強(qiáng)的延伸能力和穩(wěn)定性指導，并配備了具有DNA分解活性的特殊dsDNase廣泛認同，只需一步操作， 即可同時(shí)完成基因組清除與逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，操作方便快捷共同努力，可用于長(zhǎng)達(dá)12kb的cDNA合成以及高比例的全長(zhǎng)cDNA文庫(kù)的構(gòu)建等行業內卷。逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可以用于PCR，克隆基因逐漸完善；也可以用于qPCR參與能力，兼容染料法和探針?lè)ǎ脕?lái)檢測(cè)高拷貝或低拷貝基因是目前主流。
Oligo(dT)18 和Random primer (N6)是獨(dú)立組分充分發揮，可以自由選用，以獲得最佳的逆轉(zhuǎn)錄結(jié)果充分發揮！
引物的選擇：
1. 如果RNA模板來(lái)源于真核生物迎來新的篇章，shou選Oligo (dT)，與真核生物mRNA的3’PolyA尾配對(duì)推動並實現，可獲得最高產(chǎn)量的全長(zhǎng)cDNA薄弱點。
2. 如果對(duì)一些物種，不能確定mRNA是否有polyA尾的情況下優化程度，shou選Oligo(dT)積極性，不成功再?lài)L試基因特異性引物(GSP)和Random primer為引物。
3. 基因特異性引物(GSP)的特異性較高不斷豐富。但有些情況下實施體系，用于PCR反應(yīng)的GSP無(wú)法有效引導(dǎo)第一鏈cDNA合成，可改用Oligo (dT)或Randomprimer重新進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄各有優勢。
4. Random primer特異性zui低效果較好，所有RNA，包括mRNA持續，rRNA等多個領域，tRNA均可以作為Random primer的模板。當(dāng)目標(biāo)區(qū)域具有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)或GC含量較高產品和服務，或者模板為原核生物來(lái)源應用擴展，使用Oligo (dT)或基因特異性引物(GSP)無(wú)法有效引導(dǎo)cDNA合成時(shí)，可使用Random primer為引物前景。
5. 如果合成cDNA下游用于qPCR進一步意見，可將Oligo (dT)與Random primer混合使用（各加1μl /20μl反應(yīng)體系），可使mRNA的各個(gè)區(qū)域cDNA合成效率相同共享應用，有助于提高qPCR結(jié)果的真實(shí)性和重復(fù)性生產能力。
第一連 cDNA 合成 (以 20 μl 反應(yīng)體系為例)
1． 反應(yīng)體系的配制
操作前，請(qǐng)將各組分輕彈混勻示範推廣，點(diǎn)甩離心收集至管底堅持好，置冰上備用即將展開。
使用 RNase-Free PCR 管在冰上配制：
Components | Volume |
Total RNA | 50 ng - 5 μg |
Oligo(dT)18 (0.5 μg /μl) or Random primer (N6) (0.1 μg/μl) or GSP (Gene Specific Primer , 2 pmol/μl) or | 1 μl |
1 μl | |
1 μl | |
5x TRUE Reaction Mix | 4 μl |
dsDNase | 1 μl |
RNase free H2O | To 20 μl |
2．輕柔吸打混勻，點(diǎn)甩離心特性，置 PCR 儀進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)傳承。
如用Oligo(dT)18或基因特異性引物(GSP)，產(chǎn)物用于PCR：42℃孵育30 min建言直達；產(chǎn)物用于qPCR：42℃孵育15 min多種。
如用 Random Primer,25℃孵育10 min 后，產(chǎn)物用于 PCR不久前，42℃孵育30 min用上了；
25℃孵育 10 min 后，產(chǎn)物用于 qPCR能力建設，42℃孵育 15 min關註。
注意：如果模板具有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)或高 GC 區(qū)域，可以先只加 RNA 模板無障礙、 引物和 RNase free H2O連日來，混勻，65℃變性 5 min認為，冰上冷卻系統，點(diǎn)甩離心后加入其它成分，并將 42℃孵育溫度提升至 50°C文化價值，有助于提高產(chǎn)量形式。
3． 85°C加熱 5 sec置之不顧，失活RTase和dsDNase不斷完善，終止反應(yīng)。
逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可立即用于PCR或qPCR反應(yīng)方便，或保存于-20°C基礎上，并在半年內(nèi)使用；長(zhǎng)期存放建議分裝后在-70°C保存應用領域，cDNA應(yīng)避免反復(fù)凍融保持競爭優勢。
PCR
建議取2 - 4 μl的cDNA產(chǎn)物原液作為PCR模板。
1. 常規(guī)擴(kuò)增：71019-2x Taq PCR MasterMix (30sec/kb)
71800-2x Lightning Taq PCR MasterMix (10sec/kb)
2. 高保真擴(kuò)增：71812-2x FastHiFi PCR MasterMix (≤3kb片段)
71814-2×LongHiFi PCR MasterMix (≤10kb片段)
qPCR
建議取1~2μl cDNA產(chǎn)物原液作為20μl qPCR反應(yīng)體系的模板發展機遇。如果基因表達(dá)量較高長效機製，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)稀釋cDNA模板后使用。
相關(guān)產(chǎn)品：
71519 2x SYBR Green qPCR Mix (同TB Green Premix Ex Taq)
71600 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有qPCR儀)
91011 RNAzol Reagent（Trizol）
91013 通用型總RNA快速提取試劑盒（動(dòng)物全技術方案、植物分享、細(xì)菌、真菌信息化、酵母）
91218 動(dòng)物組織/細(xì)胞/昆蟲(chóng)總RNA提取試劑盒 (同RNeasy Plus Mini Kit)
91318 多糖多酚植物總RNA提取試劑盒（RNeasy Plant Mini Kit的升級(jí)版)
91451 高效動(dòng)物組織/細(xì)胞總RNA提取試劑盒 (動(dòng)物組織方式之一、細(xì)胞)
91452 高效植物總RNA提取試劑盒（根生動、莖、葉創新能力、花）
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