Script IV RT MasterMix ( for qPCR)反轉(zhuǎn)錄
Script IV RT MasterMix采用第四代高達(dá)60℃的全新高溫逆轉(zhuǎn)錄酶，可以通讀GC含量豐富品牌，二級結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA模板高質量，極大提高了逆轉(zhuǎn)錄效率流動性，CT值一般提早2-3個(gè)循環(huán)。Script IV RT MasterMix ( for qPCR)反轉(zhuǎn)錄
Script IV RT MasterMix
( Perfect for qPCR )
Script IV RT MasterMix ( for qPCR)反轉(zhuǎn)錄
目錄號:71618
產(chǎn)品內(nèi)容
Components | 71618-50 50 rxns (20 μl/rxn) | 71618-100 100 rxns (20 μl/rxn) |
5x RT Mix IV | 200μl | 400μl |
RNase free H2O | 1.5 ml | 1.5 ml |
保存條件
-20℃保存重要方式，有效期 12 個(gè)月開展面對面。
產(chǎn)品簡介
Script IV RT MasterMix采用第四代高達(dá)60℃的全新高溫逆轉(zhuǎn)錄酶，可以通讀GC含量豐富非常重要，二級結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA模板進一步提升，極大提高了逆轉(zhuǎn)錄效率，CT值一般提早2-3個(gè)循環(huán)認為。
5x RT Mix IV為一管式逆轉(zhuǎn)錄預(yù)混液系統，含有逆轉(zhuǎn)錄所需的所有試劑（Script IV Hˉ RTase、RNase Inhibitor重要意義、Random primers交流等、Oligo dTPrimer、dNTP Mixture規劃、RT Buffer）提高，并且，針對qPCR進(jìn)行特別優(yōu)化oligodT和N6隨機(jī)引物配比進入當下，使cDNA合成可從RNA轉(zhuǎn)錄本的各個(gè)區(qū)域起始并具有相同的逆轉(zhuǎn)錄效率紮實，zui大程度保證了qPCR結(jié)果的真實(shí)性和可重復(fù)性。
適用范圍
第一鏈cDNA合成新體系，尤其高GC含量投入力度，復(fù)雜模板的cDNA合成〔浑y發現？捎糜诟呖截愗暙I法治、低拷貝基因的檢測。
注意事項(xiàng)
1． 避免RNase污染發展需要。
2． 為保證反轉(zhuǎn)錄成功攻堅克難，建議使用高質(zhì)量的RNA樣品信息化。
3． 5x RT Mix IV含有甘油比較粘稠，容易吸附在管壁和吸頭外生動，導(dǎo)致?lián)p失， 使用前請點(diǎn)甩離心后取用創新能力。 5x RT Mix IV包含的酶過量新品技，即使每次分別按照3.8 μl使用，也不影響使用效果求得平衡。
4． 20 μl逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系建議加入不超過1μg的Total RNA紮實做。如果目的基因的表達(dá)量非常低，最多加入5 μg Total RNA至關重要，否則提供深度撮合服務，RNA量過高，可能會(huì)超出后續(xù)qPCR的線性范圍的發生。
5． 本產(chǎn)品適用于包含Ploy (A)結(jié)構(gòu)的真核生物mRNA和不包含Ploy (A)結(jié)構(gòu)的原核生物RNA組成部分、真核生物rRNA和tRNA等模板，但不適用于miRNA等小RNA模板重要手段。
6． 如果模板具有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)或高GC區(qū)域互動講，推薦使用變性步驟，即在操作步驟之前像一棵樹，將模板RNA在65℃孵育5 min后迅速轉(zhuǎn)移到冰上過程中，再加RNA模板和RNase free H2O，混勻能運用，50°C孵育15 min進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄達到。
第一連 cDNA 合成 (以 20 μl 反應(yīng)體系為例)
重要提示：操作前，請將各組分輕彈混勻不可缺少，點(diǎn)甩離心后置冰上備用蓬勃發展。
1． 反應(yīng)體系的配制
于冰上，在PCR管中重要的角色，加入以下組分：
Components | Volume |
Total RNA / mRNA | 50ng ~ 1μg / 5ng ~ 100ng |
5x RT Mix IV | 4 μl |
RNase-free H2O | To 20 μl |
2． 輕柔吸打混勻開放要求，50℃孵育15 min，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)平臺建設。
3． 85°C加熱5 sec服務機製，終止反應(yīng)。
逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可立即用于qPCR反應(yīng)使用，或保存于-20°C大幅拓展，并在半年內(nèi)使用；長期存放更加堅強，請分裝后存于-70°C與時俱進。
qPCR
建議取1~2μl cDNA產(chǎn)物原液作為20μl qPCR反應(yīng)體系的模板性能。
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