高效感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒
高效感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒是在傳統(tǒng)高效感受態(tài)細(xì)胞制備方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行適當(dāng)改良而成，操作便捷建強保護，轉(zhuǎn)化效率高
高效感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒
目錄號：30018
試劑盒組成、儲存問題、穩(wěn)定性：
試劑盒組成 | 保存 | 100μl×100支 |
溶液A | 4℃ | 50ml |
溶液B | 4℃ | 10ml |
短期使用4℃日漸深入，避免污染。長期保存－20℃一年有效共同努力。
產(chǎn)品介紹：
1. 高效感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒是在傳統(tǒng)高效感受態(tài)細(xì)胞制備方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行適當(dāng)改良而成行業內卷，操作便捷，轉(zhuǎn)化效率高逐漸完善。
2. 使用本試劑盒可以使感受態(tài)效率達(dá)到108 cfu/μg質(zhì)粒參與能力。對于小的質(zhì)粒效率略高，而對于大的質(zhì)粒則效率略低一些是目前主流。用本試劑盒制備的高效感受態(tài)細(xì)胞不僅可以轉(zhuǎn)化質(zhì)粒充分發揮，而且非常適合于轉(zhuǎn)化普通的連接產(chǎn)物，特別適合于轉(zhuǎn)化平端連接等需要高轉(zhuǎn)化效率的情況充分發揮。
3. 使用本試劑盒操作簡單選擇適用，細(xì)菌培養(yǎng)好后僅需60分鐘左右即可完成高效感受態(tài)細(xì)胞的制備。
4. 本試劑盒適用于絕大部分常見的大腸桿菌設計，包括Top 10交流、DH5α、BL21（DE3）提供堅實支撐、JM109還不大、TG1、HB101和XL-1等信息化技術。但是不同的菌種發揮作用，轉(zhuǎn)化效率可能有很大差別。
5. 本試劑盒可以分多次使用逐步顯現，共可以制備100支100μl的感受態(tài)細(xì)胞銘記囑托。
v 注意事項：
1. 所有試劑引領、耗材、儀器開放以來、設(shè)備務(wù)必經(jīng)過滅菌處理占。
2. 在制備感受態(tài)細(xì)胞的過程中均使用不含抗生素的LB。在使用感受態(tài)菌的過程中熱休克后的37℃培養(yǎng)時也必須使用無抗生素的LB提供了有力支撐，即便轉(zhuǎn)入的質(zhì)粒是有抗性的激發創作。
3. 感受態(tài)細(xì)胞制備完畢請快速轉(zhuǎn)入-70℃。
操作步驟：(實驗前請先閱讀注意事項)
1. 涂平板：
為取得優(yōu)良的感受態(tài)效率進一步意見，必須先把甘油菌或其它形式保存的菌種涂LB平板增幅最大，并培養(yǎng)過夜。
2. 接種：
取一有新鮮培養(yǎng)的菌種的LB平板生產能力，后續(xù)操作均在超凈臺內(nèi)進(jìn)行標準。把鑷子的頂端在70%酒精中蘸一下，并在酒精燈上略略燒一下堅持好，使鑷子的頂端處于無菌狀態(tài)即將展開。用鑷子夾取一個無菌的塑料槍頭或牙簽，從平板上挑取一個單克隆特性，然后把蘸有菌種的塑料槍頭或牙簽放到裝有3毫升SOB或者LB（客戶應(yīng)該根據(jù)菌種不同選擇適合的培養(yǎng)基）的細(xì)菌培養(yǎng)試管內(nèi)傳承。上述操作也可以使用接種環(huán)等進(jìn)行操作。
3. 培養(yǎng)：
37℃約250rpm培養(yǎng)過夜更加完善，通常培養(yǎng)時間控制在16小時左右為宜。絕對不宜超過18小時建設應用。
4. 再接種培養(yǎng)：
根據(jù)需要制備的高效感受態(tài)細(xì)胞的量支撐作用，按照1:500的比例用新鮮培養(yǎng)的過夜菌接種培養(yǎng)。例如取100微升的新鮮過夜菌到50毫升SOB或者LB中動力，37℃約250rpm培養(yǎng)同時。
5. 制備感受態(tài)細(xì)胞：
e 注意：離心機轉(zhuǎn)速和離心時間對于感受態(tài)細(xì)胞制作非常重要，不同種類的細(xì)菌優(yōu)良的轉(zhuǎn)速和離心時間不同效高性，應(yīng)該根據(jù)具體情況優(yōu)化模式。優(yōu)良狀況是適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)速和離心時間讓細(xì)菌剛好離心沉淀下來，又不能太緊密提升，否則重懸困難高品質，只能用力吹打才能重懸，會對細(xì)胞造成損害支撐能力，影響轉(zhuǎn)化效率資源優勢。
1) 在培養(yǎng)的細(xì)菌OD600達(dá)到0.5左右時，把培養(yǎng)的菌液置于冰浴中置之不顧，冷卻15分鐘不斷完善。注意：后續(xù)所有操作均須在4度或冰浴進(jìn)行數字化。
2) 4℃（離心機必須預(yù)先冷卻）3000-3500g離心5分鐘收集細(xì)菌，棄上清（盡量去除干凈上清基礎上，殘留越少越好）各領域。
3) 如果離心沉淀前的菌量為50毫升，按后續(xù)操作進(jìn)行保持競爭優勢，如果是其它體積則按比例換算后進(jìn)行后續(xù)操作進行培訓。
4) 用10毫升預(yù)冷的高效感受態(tài)制備溶液A輕輕重懸細(xì)菌沉淀（為方便重懸，可先加少量溶液A不容忽視，重懸后再加入剩余的溶液A）組織了，吹打重懸時一定要很輕柔，否則會影響效果說服力。
5) 冰浴15分鐘搶抓機遇。
6) 4℃（離心機必須預(yù)先冷卻） 3000-3500g離心5－7分鐘收集細(xì)菌，棄上清表示。
7) 用2毫升預(yù)冷的高效感受態(tài)制備溶液B輕輕重懸細(xì)菌沉淀全面闡釋。吹打重懸時時一定要很輕柔，否則會影響效果競爭力所在。
8) 冰浴15分鐘引人註目。
9) 冰浴上進(jìn)行分裝，可以根據(jù)需要適當(dāng)分裝成50-200微升/管溝通機製。
10) 立即使用或用液氮或乙醇干冰浴速凍后-70℃保存好宣講。
