Qiagen試劑盒提取總RNA的操作過程：
1增幅最大、稱取新鮮葉組織樣品100 mg共享應用，液氮速凍生產能力。
2、在預(yù)冷的研缽中研磨成細(xì)粉示範推廣，轉(zhuǎn)移到2 ml離心管中堅持好。注意研磨不*則會(huì)造成嚴(yán)重產(chǎn)量降低。
3大幅增加、待液氮揮發(fā)(但不能解凍)后特性，加入450 ml提取緩沖液RLT，渦旋混勻等特點，并在56℃溫育1~3 min建言直達。注意：在RLT臨用前加入1/100體積的14.5 M β-巰基乙醇，加后保存時(shí)間不超過1個(gè)月建設應用，RLT溶液應(yīng)在1個(gè)月內(nèi)使用支撐作用。對(duì)于高淀粉含量的材料，可將溫度提高到60℃以上防止淀粉結(jié)塊動力。
4同時、將裂解液加到離心柱(淺紫色柱)上，下接一個(gè)2 ml收集管效高性，zui大轉(zhuǎn)速離心2 min模式。如果將裂解液粘稠，可切去吸頭頂端互動互補，用大口吸頭吸取發揮重要帶動作用。裂解液通過柱子時(shí)被均質(zhì)化，大部分組織碎片都被截留在柱子表面意料之外，只有少部分通過柱子形成沉淀文化價值，因此，應(yīng)小心吸取上清液置之不顧，轉(zhuǎn)移到另一新離心管不斷完善，不要吸細(xì)胞碎片殘?jiān)恋怼?/p>
5、加入0.5倍體積(225 µL)96~99.99%乙醇方便，吹打混合均勻基礎上。如果裂解液有損失，則相應(yīng)減少乙醇用量應用領域。加入乙醇后保持競爭優勢，可能會(huì)出現(xiàn)沉淀，但對(duì)提取無影響發展機遇。
6長效機製、將混合液全部(包括沉淀675 µL)轉(zhuǎn)移到吸附RNA的離心柱(粉紅色柱)，下接一個(gè)2 ml收集管全技術方案，大于8000 g或10000 r/min離心15 sec分享。如果混合液體積超過700 µL搶抓機遇，每次只加700 µL到離心柱上，按上述條件離心表示。棄去管內(nèi)液體，重復(fù)使用收集管非常激烈。
7競爭力所在、加入700 µL洗脫液，大于8000 g或10000 r/min離心25 sec領域，棄去收集管溝通機製。
8、將離心柱轉(zhuǎn)移到一新的2 ml收集管上註入新的動力，加入500 µL RPE液領先水平，大于8000 g或10000 r/min離心15 sec。棄去管內(nèi)液體雙重提升，重復(fù)使用收集管戰略布局。注意：Qiagen試劑盒提供濃縮的PRE洗脫液，所心使用前必須加入4倍體積的96~99.99%乙醇深入開展，成為工作液更為一致。
9、加入500 µL RPE液到離心柱上技術的開發，zui大轉(zhuǎn)速離心2 min研究與應用，干燥離心柱，棄去收集管更高效。殘留乙醇會(huì)干擾隨后的反應(yīng)全面協議，這次離心要保證無乙醇?xì)埩簟Ｈ粲幸掖細(xì)埩艟唧w而言，以zui大轉(zhuǎn)速離心1 min工具。
10、把離心柱連接到一新的1.5 ml收集管上發展契機，加入20~30 µL 無RNase水廣泛關註，大于8000 g或10000 r/min離心1 min，洗脫RNA發力。若RNA產(chǎn)量在20 μg以上優勢領先，用30~50 µL無RNase水再洗脫一次。RNA樣品存于-20℃或-80℃冰箱共創美好。
11推動並實現、分光光度計(jì)測定RNA。開啟紫外分光光度計(jì)覆蓋範圍，預(yù)熱30 min優化程度。用DEPC處理水校正零點(diǎn)積極性。用DEPC處理水稀釋RNA樣品30~50倍，將稀釋液轉(zhuǎn)移到比色杯中不斷豐富。讀取230實施體系、260、280各有優勢、310 nm的OD值效果較好。計(jì)算出樣品濃度和OD比值。OD260/ OD280比值應(yīng)為1.7~2.1持續，低于1.7等多個領域，說明有蛋白質(zhì)或酚污染;OD260/ OD230比值應(yīng)大于2，低于此值產品和服務，說明有糖促進善治、鹽、胍等小分子污染多樣性。
12發揮效力、瓊脂糖凝膠甲醛變性電泳。首先制備凝膠(1.2%)明顯。稱取1.2 g瓊脂糖服務水平，加72 ml DEPC處理的水，加熱溶化技術創新。冷卻至60℃處理方法，在通風(fēng)櫥內(nèi)加入10×凝膠緩沖液10 ml，甲醛(37%)18 ml持續向好，混勻后倒膠習慣。然后制備樣品。在離心管中進展情況，將RNA樣品與5×變性上樣緩沖液按4:1比例混勻的積極性。65℃溫育5~10 min，迅速在冰上冷卻5 min至關重要，瞬時(shí)離心數(shù)秒不久前。上樣前凝膠須預(yù)電泳5 min，隨后將樣品加入上樣孔提升行動。以5 V/cm電壓電泳1.5~2 hr能力建設。待溴酚藍(lán)遷移至凝膠長度的2/3~4/5處結(jié)束電泳。將凝膠置于溴化乙錠溶液(0.5 µg/mL研究進展，用0.1 mol/L乙酸胺配制)中當(dāng)色約30 min無障礙。紫外燈下觀察結(jié)果。
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