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Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒
更新時(shí)間:2016-03-28   點(diǎn)擊次數(shù):2460次

Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒

 

組成

包裝(2500微孔)

保存

5×G250染色液

100ml

2-8

PBS稀釋液

30ml

2-8

蛋白標(biāo)準(zhǔn)(5mg/ml BSA)

1ml

-20

本試劑盒自訂購(gòu)之日起九個(gè)月內(nèi)有效重要的作用。本試劑盒用于酶標(biāo)板或者200ul比色皿時(shí)可做2500孔成就。當(dāng)使用2ml比色皿時(shí)可做250孔,如果是1ml比色皿時(shí)可做500孔緊密相關。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

考馬斯亮蘭G-250染料,在酸性溶液中與蛋白質(zhì)結(jié)合,使染料的zui大吸收峰的位置(lmax)重要的,由465nm變?yōu)?/span>595nm,在一定的濃度范圍內(nèi)姿勢,測(cè)定的吸光度值A595相互融合,與蛋白質(zhì)濃度成正比。Bradford法測(cè)定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響技術。樣品中巰基乙醇的濃度可高達(dá)1M推廣開來,二硫蘇糖醇的濃度可高達(dá)5mM。但受略高濃度的去垢劑影響相對較高。需確保SDS低于0.1%資源配置,Triton X-100低于0.1%Tween 20, 60, 80低于0.06%相關。含去垢劑的樣品推薦使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒大力發展。

操作說(shuō)明:

一,微孔酶標(biāo)儀法

1.        *溶解蛋白標(biāo)準(zhǔn)品生產效率,取10ml產能提升,加240ulPBS稀釋至250ml ,使終濃度為0.2mg/ml節點。待測(cè)蛋白樣品在什么溶液中通過活化,標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡(jiǎn)便起見的特點,也可以用0.9%NaClPBS稀釋標(biāo)準(zhǔn)品健康發展。

2.        5×G250染色液使用前請(qǐng)顛倒3-5次混勻,取1ml  5×G250染色液大數據,加入4ml雙蒸水長效機製,混勻成1×G250染色液講實踐,此1×G250染色液可在4℃保存一周。

3.        將標(biāo)準(zhǔn)品按0, 2,4,6,8,12,16,20微升分別加到96孔板中奮戰不懈,加PBS稀釋液補(bǔ)足到20微升市場開拓。

4.        將樣品作適當(dāng)稀釋(多做幾個(gè)梯度,如作2倍大大縮短、4倍要落實好、8倍稀釋),加20微升到96孔板的樣品孔中更默契了。由于移液器在取小量時(shí)的誤差新技術,標(biāo)準(zhǔn)線前面的點(diǎn)可能不很準(zhǔn)確,所以盡可能的讓樣品點(diǎn)落在標(biāo)準(zhǔn)線1/2后順滑地配合。

5.        各孔加入200微升稀釋后的1×G250染色液深入,室溫放置3-5分鐘。

6.        用酶標(biāo)儀測(cè)定A595前沿技術,或560-610nm之間的其它波長(zhǎng)的吸光度全會精神。

7.        根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中的蛋白濃度。

  

二拓展基地,分光光度計(jì)法

如沒有酶標(biāo)儀集中展示,可用分光光度計(jì)在離心管中混勻后加入比色皿中比色。

步驟如下:

1體系流動性,取八支(或者更多)干凈的10ml離心管探索創新,標(biāo)記上號(hào)。

2實現了超越,取100ulBSA新產品,加PBS2.4ml稀釋至終濃度為0.2mg/ml

3橋梁作用,5×G250染色液使用前請(qǐng)顛倒3-5次混勻長遠所需,取10ml  5×G250染色液,加入40ml雙蒸水讓人糾結,混勻成1×G250染色液規模,此1×G250染色液可在4℃保存一周。

4基石之一,按下表加入試劑(以每孔5ml計(jì)聯動,多余的用來(lái)潤(rùn)洗比色皿)

 

 

離心管號(hào)

1

2

3

4

5

6

7(樣品管1

8(樣品管2

9(樣品管3

標(biāo)準(zhǔn)蛋白BSA

0

100ul

200ul

300ul

400ul

500ul

500ul適當(dāng)稀釋的樣品1

500ul適當(dāng)稀釋的樣品2

……

PBS

500ul

400ul

300ul

200ul

100ul

0

0

0

0

1×G250染色液

5ml

5ml

5ml

5ml

5ml

5ml

5ml

5ml

5ml

 

5,反應(yīng)3分鐘后測(cè)OD值共同努力。為了實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性行業內卷,可每間隔2分鐘加一管染色液,每間隔2分鐘測(cè)一管OD值。如下表能力和水平。

離心管號(hào)

1

2

3

4

5

6

7

8

……

加染色液(分鐘)

0

2

4

6

8

10

12

14

……

測(cè)OD

3

5

7

9

11

13

15

17

……

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