組成 | 包裝(2500微孔) | 保存 |
5×G250染色液 | 100ml | 2-8℃ |
PBS稀釋液 | 30ml | 2-8℃ |
蛋白標(biāo)準(zhǔn)(5mg/ml BSA) | 1ml | -20℃ |
本試劑盒自訂購(gòu)之日起九個(gè)月內(nèi)有效重要的作用。本試劑盒用于酶標(biāo)板或者200ul比色皿時(shí)可做2500孔成就。當(dāng)使用2ml比色皿時(shí)可做250孔,如果是1ml比色皿時(shí)可做500孔緊密相關。
考馬斯亮蘭G-250染料,在酸性溶液中與蛋白質(zhì)結(jié)合,使染料的zui大吸收峰的位置(lmax)重要的,由465nm變?yōu)?/span>595nm,在一定的濃度范圍內(nèi)姿勢,測(cè)定的吸光度值A595相互融合,與蛋白質(zhì)濃度成正比。Bradford法測(cè)定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響技術。樣品中巰基乙醇的濃度可高達(dá)1M推廣開來,二硫蘇糖醇的濃度可高達(dá)5mM。但受略高濃度的去垢劑影響相對較高。需確保SDS低于0.1%資源配置,Triton X-100低于0.1%,Tween 20, 60, 80低于0.06%相關。含去垢劑的樣品推薦使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒大力發展。
操作說(shuō)明:
1. *溶解蛋白標(biāo)準(zhǔn)品生產效率,取10ml產能提升,加240ulPBS稀釋至250ml ,使終濃度為0.2mg/ml節點。待測(cè)蛋白樣品在什么溶液中通過活化,標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡(jiǎn)便起見的特點,也可以用0.9%NaCl或PBS稀釋標(biāo)準(zhǔn)品健康發展。
2. 5×G250染色液使用前請(qǐng)顛倒3-5次混勻,取1ml 5×G250染色液大數據,加入4ml雙蒸水長效機製,混勻成1×G250染色液講實踐,此1×G250染色液可在4℃保存一周。
3. 將標(biāo)準(zhǔn)品按0, 2,4,6,8,12,16,20微升分別加到96孔板中奮戰不懈,加PBS稀釋液補(bǔ)足到20微升市場開拓。
4. 將樣品作適當(dāng)稀釋(多做幾個(gè)梯度,如作2倍大大縮短、4倍要落實好、8倍稀釋),加20微升到96孔板的樣品孔中更默契了。由于移液器在取小量時(shí)的誤差新技術,標(biāo)準(zhǔn)線前面的點(diǎn)可能不很準(zhǔn)確,所以盡可能的讓樣品點(diǎn)落在標(biāo)準(zhǔn)線1/2后順滑地配合。
5. 各孔加入200微升稀釋后的1×G250染色液深入,室溫放置3-5分鐘。
6. 用酶標(biāo)儀測(cè)定A595前沿技術,或560-610nm之間的其它波長(zhǎng)的吸光度全會精神。
7. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中的蛋白濃度。
二拓展基地,分光光度計(jì)法
如沒有酶標(biāo)儀集中展示,可用分光光度計(jì)在離心管中混勻后加入比色皿中比色。
步驟如下:
1體系流動性,取八支(或者更多)干凈的10ml離心管探索創新,標(biāo)記上號(hào)。
2實現了超越,取100ulBSA新產品,加PBS2.4ml稀釋至終濃度為0.2mg/ml。
3橋梁作用,5×G250染色液使用前請(qǐng)顛倒3-5次混勻長遠所需,取10ml 5×G250染色液,加入40ml雙蒸水讓人糾結,混勻成1×G250染色液規模,此1×G250染色液可在4℃保存一周。
4基石之一,按下表加入試劑(以每孔5ml計(jì)聯動,多余的用來(lái)潤(rùn)洗比色皿)
離心管號(hào) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7(樣品管1) | 8(樣品管2) | 9(樣品管3) |
標(biāo)準(zhǔn)蛋白BSA | 0 | 100ul | 200ul | 300ul | 400ul | 500ul | 500ul適當(dāng)稀釋的樣品1 | 500ul適當(dāng)稀釋的樣品2 | …… |
PBS | 500ul | 400ul | 300ul | 200ul | 100ul | 0 | 0 | 0 | 0 |
1×G250染色液 | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml |
5,反應(yīng)3分鐘后測(cè)OD值共同努力。為了實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性行業內卷,可每間隔2分鐘加一管染色液,每間隔2分鐘測(cè)一管OD值。如下表能力和水平。
離心管號(hào) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | …… |
加染色液(分鐘) | 0 | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 | 12 | 14 | …… |
測(cè)OD值 | 3 | 5 | 7 | 9 | 11 | 13 | 15 | 17 | …… |