產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
細(xì)胞凋亡(Apoptosis)的檢測(cè)方法有形態(tài)學(xué)科普活動、生物化學(xué)發展需要、DNA片段化檢測(cè)方法以及TUNEL等標(biāo)記片段化DNA方法快速融入,但從細(xì)胞凋亡概念產(chǎn)生的歷史及準(zhǔn)確性方面考慮重要的角色,使用顯微鏡進(jìn)行的形態(tài)學(xué)觀察也是很重要的開放要求。細(xì)胞死亡的檢測(cè)可以通過(guò)熒光色素染色區(qū)分活細(xì)胞、死細(xì)胞平臺建設,測(cè)定細(xì)胞代謝活性和形態(tài)學(xué)觀察服務機製。這些方法都是利用細(xì)胞凋亡這種情況進(jìn)行測(cè)定的,因而不一定反映實(shí)際情況重要的作用。MTT法是測(cè)定線粒體中*酶的活性更多可能性,反映細(xì)胞數(shù)目的變化去創新,其結(jié)果不細(xì)胞死亡的數(shù)目未必*一致。
吖啶橙(Acridine Orange, AO)屬于三環(huán)雜芳香燃料緊迫性,可以標(biāo)記DNA又進了一步、RNA,屬于異染性熒光染料,AO常用于細(xì)胞內(nèi)DNA和RNA進(jìn)行檢測(cè)多元化服務體系。AO與核酸結(jié)合方式主要有:1規劃、插入性結(jié)合,AO嵌入核酸雙鏈的堿基對(duì)之間深度,這種結(jié)合方式主要為AO與DNA的結(jié)合帶動擴大,其熒光収射峰為530nm,激發(fā)后呈綠色熒光開拓創新;2持續發展、靜電吸引新產品,帶正電荷的AO與單鏈核酸的磷酸根(帶負(fù)電荷)產(chǎn)生靜電間的吸引結(jié)合更為一致,這種結(jié)合方式主要為AO與 RNA的結(jié)合,其熒光發(fā)射峰為640nm有力扭轉,激發(fā)后呈紅色熒光發揮效力,少量結(jié)合會(huì)呈桔黃色或桔紅色熒光新格局。因此,吖啶橙嵌合到雙鏈DNA分子中顯綠色安全鏈,與DNA單鏈或RNA結(jié)合時(shí)収橙紅色熒顯示。
溴化乙錠(Ethidium Bromide,EB)嵌合到雙鏈DNA或RNA的堿基對(duì)中,無(wú)堿基特異性真正做到,發(fā)紅色熒光科普活動。吖啶橙可透過(guò)活細(xì)胞膜,EB不能通過(guò)與活細(xì)胞膜具有相同通透性的細(xì)胞膜強化意識。
產(chǎn)品組成:
名稱/編號(hào) | D0839 100T | Storage |
試劑(A):AO solution | 200ul | 4℃ 避光 |
試劑(B):EB solution | 200ul | RT |
試劑(C):AO/EB Dilution Buffer | 50ml | 4℃ 避光 |
使用說(shuō)明書 | 1份 |
自備材料:
1長期間、熒光顯微鏡
2、PBS
3現場、細(xì)胞計(jì)數(shù)板
4高端化、載玻片、蓋玻片
操作步驟(僅供參考):
1不久前、AO/EB工作液的配制:取試劑(A)效果、試劑(B)、試劑(C)合規意識,按照試劑(A):試劑(B):試劑(C)=1:1:8的比例稀釋成AO/EB工作液密度增加。
2、每份細(xì)胞樣品中加入AO/EB工作液2μl,混合均勻機遇與挑戰。
3廣泛關註、低速離心:500g離心5min,棄上清集成技術。
4就能壓製、用 AO/EB Dilution Buffer重懸細(xì)胞,細(xì)胞計(jì)數(shù)適應能力,將細(xì)胞密度調(diào)整為0.5~5×106個(gè)/ml更優美。
5、每25μl細(xì)胞懸液中防控,加入1μl AO/EB工作液成效與經驗,充分混勻。
6堅實基礎、取潔凈載玻片稍有不慎,滴加上5μl細(xì)胞懸液,輕輕蓋上蓋玻片等地。
7最為顯著、在熒光顯微鏡B域進(jìn)行觀察。
染色結(jié)果:
活細(xì)胞 | 綠色熒光 |
死細(xì)胞 | 橙色熒光 |
注意事項(xiàng):
1規定、用能通過(guò)活細(xì)胞膜與DNA結(jié)合發(fā)藍(lán)色熒光Hoechist 33342和只能通過(guò)死細(xì)胞與DNA結(jié)合后發(fā)紅色熒光的碘化吡啶(propidium iodide環境,PI)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行雙染的方法也比較常用。
2供給、如有低溫離心機(jī)進(jìn)行離心效果更佳優勢與挑戰。
3、操作過(guò)程中應(yīng)注意減少試劑(A)解決方案、試劑(B)暴露于強(qiáng)光下的時(shí)間。
4有力扭轉、EB solution 有一定毒性上高質量,請(qǐng)小心操作。
5廣度和深度、為了您的安全和健康著力增加,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
有效期:6個(gè)月有效科技實力。