Western blotting檢測(cè)試劑盒（DAB） NobleRyder P0910
北京諾博萊德科技有限公司供應(yīng)Western blotting檢測(cè)試劑盒（DAB） NobleRyder P0910量大優(yōu)惠探索創新，咨詢 ：
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P0910 | Western blotting（小鼠IgG）DAB檢測(cè)試劑盒 | 920 |
P0920 | Western blotting（兔IgG）DAB檢測(cè)試劑盒 | 920 |
P0930 | Western blotting（山羊IgG）DAB檢測(cè)試劑盒 | 920 |
試劑盒組成
1. 封閉試劑：30g（可配制400ml）脫脂奶粉及其他蛋白，緩沖鹽等混合物。
2. 10倍濃縮抗體稀釋液前來體驗，50ml。
3. HRP標(biāo)記二抗確定性，0.5ml更加廣闊，效價(jià)1：400。
4. DAB顯色液（20×）講故事，5ml A+5ml B非常完善。
原理：
SDS-PAGE電泳后，蛋白質(zhì)按照分子量大小分離自動化方案，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）后緊密協作，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)越來越重要，以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原線上線下，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)醒悟，經(jīng)過底物顯色以檢測(cè)電泳分離的特異性的蛋白講道理。
操作步驟：
常規(guī)電泳轉(zhuǎn)膜后，
1） 清洗轉(zhuǎn)印膜：將膜剝離下后技術先進，作好標(biāo)記更多的合作機會，一般在左上角剪一缺口。室溫用TBS-T漂洗3次每次5min,以盡量洗去轉(zhuǎn)印膜上的SDS認為，防止影響后面的抗體結(jié)合服務好。
2） 按5g封閉試劑加100ml雙蒸水計(jì)，配制膜封閉液反應能力，配好的膜封閉液為乳白色懸液共謀發展，將漂洗過的轉(zhuǎn)印膜，封閉液內(nèi)結構重塑，搖床震動(dòng)聽得懂，室溫封閉30min應用優勢。 A@ 3） 用TBS-T ，PH7.6洗液全方位，室溫漂洗3次每次5min高效節能。
3）將10×抗體稀釋液用雙蒸水稀釋成1×（10ml 10×抗體稀釋液加入90ml雙蒸水，混勻大局，可4℃保存三個(gè)月）新創新即將到來。此稀釋液可作為一抗和二抗的稀釋液。
4）用1×的抗體稀釋液稀釋抗體有序推進。根據(jù)用量以及一抗的推薦稀釋濃度來稀釋一抗創造性。將雜交膜放入雜交袋中，加入一抗工作液道路，封口規模設備，4℃孵育過液或37℃搖動(dòng)孵育2h。此用過的抗體一般可回收第二天再使用一次指導。注：如果所加一抗不同競爭力，可在此步將膜沿電泳方向剪成條，分別作好標(biāo)記進一步完善，分開孵育集聚。
5）用TBS-T ，PH7.6洗液調整推進，室溫漂洗3次每次5min狀況。
6）用稀釋好的抗體稀釋液稀釋抗體。根據(jù)用量不斷創新，按10ml抗體稀釋液加入10ulHRP標(biāo)記二抗的比例建立和完善，配制二抗工作液。將雜交膜放入雜交袋中參與水平，加入加入二抗工作液大型，封口，4℃孵育過液或37℃搖動(dòng)孵育2h明確相關要求。此用過的抗體一般可回收第二天再使用一次重要意義。
7）用TBS-T ，PH7.6洗液深化涉外，室溫漂洗3次每次10min體系。
8）配制DAB顯色：根據(jù)用量，取TBS-T 4ml開展試點，加入DAB顯色液A攜手共進、DAB顯色液B各200ul，混勻，加在膜正面大部分，室溫下顯色強大的功能。在目標(biāo)條帶顯出后，而且背景未出時(shí)解決方案，放入水中終止顯色優勢。
注意事項(xiàng)：
1， 請(qǐng)根據(jù)一抗來源選擇試劑盒增產。括號(hào)里面代標(biāo)一抗的來源而不是標(biāo)本的來源便利性。
2， western blotting DAB顯色法操作簡單行動力，但其敏感性與ECL發(fā)光發(fā)有一定的差距提供有力支撐，一般只適用于豐度較高的蛋白。
3保供， 可以根據(jù)顯色結(jié)果來優(yōu)化實(shí)驗(yàn)反應(yīng)時(shí)間自行開發。如背景過深，可延長膜封閉時(shí)間責任，加長zui終漂洗次數(shù)與時(shí)間應用情況。如果條帶過弱，可延長抗體孵育時(shí)間組建。
4有很大提升空間， 如果*沒有條帶，請(qǐng)檢查前期蛋白處理及實(shí)驗(yàn)過程首次， 如果確認(rèn)無誤可能性更大，反復(fù)兩次依舊無結(jié)果，請(qǐng)換用ECL發(fā)光法顯色搖籃。
5技術， TBS-T（0.01M）配制方法：稱取NaCl 8.5g ，Tris 1.21g 深入，用800ml的雙蒸水溶解技術研究，用鹽酸調(diào)PH到7.6重要的，再加入0.5ml Tween－20開展研究，用雙蒸水 加至1000ml，混勻即可相互融合。（也可按照自己的配制習(xí)慣來配制）
北京諾博萊德科技有限公司位于北京市海淀區(qū)首要任務，是一家專業(yè)從事生化試劑、分子生物學(xué)試劑不同需求、實(shí)驗(yàn)耗材及實(shí)驗(yàn)儀器研發(fā)發展、銷售、服務(wù)為一體的生物科技公司，公司主要經(jīng)營的進(jìn)口品牌包括Qiagen, Omega, Sigma, Invitrogen, Roche, Abcam, Santa cruz, Fermantas（MBI）, NEB, BD, Peprotech, Abnova, R&D systerms, GE, Biovision, Millipore, Amresco, Merck, CST, Axygen, Corning, NUNC, Thermo fihser, Eppendorf等面向；產(chǎn)品涉及化工原料支撐作用、生化試劑、分子克隆相關(guān)試劑建設項目、細(xì)胞培養(yǎng)及檢測(cè)常用試劑最為突出、實(shí)驗(yàn)室常用耗材及儀器。
Western blotting檢測(cè)試劑盒（DAB） NobleRyder P0910
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