鎳-瓊脂糖凝膠 H.P. Ni Sepharose H.P.
產(chǎn) 地：諾博萊德科技對應進口產(chǎn)品：Ni Sepharose High Performance產(chǎn) 地：國產(chǎn)性 狀：凝膠狀持續，保存在20%酒精溶液中凝膠類型：小配體親和色譜填料結構成分：6%交聯(lián)瓊脂糖平均粒徑：34µm配基基團：Ni2+ 配體密度：15μmol/ml工作PH值：3-12操作溫度：4-30℃保存條件：4℃
產(chǎn)品名稱：鎳-瓊脂糖凝膠 HP
產(chǎn) 地：諾博萊德科技
對應進口產(chǎn)品：Ni Sepharose High Performance
產(chǎn) 地：國產(chǎn)
性 狀：凝膠狀自行開發，保存在20%酒精溶液中
凝膠類型：小配體親和色譜填料
結構成分：6%交聯(lián)瓊脂糖
平均粒徑：34µm
配基基團：Ni2+
配體密度：15μmol/ml
工作PH值：3-12
操作溫度：4-30℃
保存條件：4℃
應 用：分離帶His標簽的重組蛋白及能被金屬離子吸附的多肽更多的合作機會、蛋白特點、核苷酸堅定不移、磷酸化蛋白組合運用，高分辨率。
產(chǎn)品說明：
Ni-瓊脂糖凝膠H.P.是用于純化6×His標簽重組蛋白的一種純化介質(zhì)迎難而上，它是由6%交聯(lián)的Sepharose耦連了一種四齒螯合劑NTA而得. 它可用于在非變性或變性條件下純化任何表達系統(tǒng)表達的6×His標簽重組蛋白積極。NTA，含有四個螯合區(qū)堅持先行，較一般的三齒螯合劑能更好的結合Ni2+產業。6×His可與Ni2+螯合，從而使His標簽蛋白結合在Ni-NTA純化介質(zhì)上情況較常見，未結合的蛋白被洗滌下去可持續，結合在介質(zhì)上的蛋白經(jīng)過一定濃度的咪唑或低pH緩沖液的溫和洗脫下來，從而得到高純度的目的蛋白體製。該純化介質(zhì)與His標簽蛋白具有*的親和力構建，可達5-20 mg/mL》昭由?？稍诜亲冃院妥冃詶l件下純化任何表達系統(tǒng)所得的His標簽蛋白共創輝煌。純化程序簡單，所得的蛋白純度可高達95%進一步。Ni-NTA可再生4-6次大部分，重復使用。本產(chǎn)品懸浮液為20%乙醇，已螯合Ni2+解決方案。
操作方法：
A. 非變性條件下抽提His標簽蛋白
1) 準備細胞優勢，接種，誘導表達基礎。收集細胞提供堅實支撐，置于-70°C或立即進行步驟2操作。
2) 加入1/20細胞生長體積的NTA-0 Buffer和PMSF經過。PMSF使用的工作濃度為1 mM現(xiàn)用現(xiàn)加簡單化。
3) 將細胞懸浮起來力度，加入溶菌酶明確了方向，混勻，冰上放置30分鐘勇探新路，超聲或勻漿破碎細胞單產提升。該步驟冰上操作。
4) 加入10% Triton X-100, 使終濃度為0.05%試驗，充分混勻勞動精神，冰上放置15分鐘。
5) 12000 rpm/min(20,000×g以上)製度保障，4°C離心15分鐘以上預下達。取上清，置于冰上備用或-20°C保存統籌推進。
6) 將NTA樹脂裝入合適的層析柱方案，層析用10倍NTA體積的NTA-0 Buffer洗。
7) 將樣品加至NTA層析柱中了解情況，流速在15 mL/h左右深入，收集穿透部分，用SDS/PAGE分析蛋白的結合情況重要的。
8) 層析用5倍NTA體積的NTA-0 Buffer洗開展研究，流速控制在30 mL/h左右。
9) 分別用5倍NTA體積的NTA-20相互融合、NTA-40首要任務、NTA-60、NTA-80不同需求、NTA-100發展、NTA-200、NTA-1000 Buffer洗脫創造更多，流速控制在15 mL/h左右宣講活動，收集洗脫液，每管收集一個NTA體積。
10) 確定目標蛋白質(zhì)在洗脫液中的分布情況豐富內涵。為有效的方式是SDS-PAGE分析生產效率。也可以用Bradford 蛋白質(zhì)測定試劑盒，快速確定蛋白質(zhì)的含量適應性，然后用SDS/PAGE分析蛋白質(zhì)的分布節點。
11)純化的目標蛋白質(zhì)的保存條件需要根據(jù)蛋白質(zhì)的性質(zhì)和用途確定。 NTA-0落地生根、20的特點、40、60有效保障、80大數據、100、200講實踐、1000Buffer分別為濃度20 mM Tris-HCl pH7.9, 0.5 M NaCl, 10% Glycerol數字技術，添加0、20市場開拓、40措施、60、80要落實好、100緊密相關、200、1000 mM Imidazole先進技術。
B.變性條件下從包涵體中純化His標簽蛋白
1) 準備細胞培訓，接種，誘導表達深入。收集細胞效高，置于-70°C或立即進行步驟2操作。
2) 加入1/20細胞生長體積的GuNTA-0 Buffer和PMSF基礎。PMSF使用的工作濃度為1 mM現(xiàn)用現(xiàn)加性能。
3) 將細胞懸浮起來，冰上超聲破碎細胞對外開放，降低粘稠度技術創新。
4) 室溫放置30分鐘，間或混勻或用磁力攪拌資料。
5) 12000轉(zhuǎn)/分（20,000×g以上）廣泛應用，4°C離心15分鐘以上。取上清新產品，置于冰上備用或-20°C保存去完善。
6) 將NTA樹脂裝入合適的層析柱橋梁作用，層析用10倍NTA體積的GuNTA-0 Buffer洗。
7) 將樣品加到NTA層析柱中求索，流速控制在15 mL/h左右讓人糾結，收集穿透部分，用于SDS/PAGE分析蛋白質(zhì)的結合情況穩定發展。
8) 層析用5倍NTA體積的GuNTA-0 Buffer洗基石之一，流速控制在30 mL/h左右。
9) 分別用5倍NTA體積GuNTA-20增持能力、GuNTA-40共同努力，GuNTA-60、GuNTA-100追求卓越、GuNTA-500洗脫逐漸完善，流速在15 mL/ h左右，收集洗脫液覆蓋，每管收集一個NTA體積異常狀況。
10) 確定目標蛋白質(zhì)在洗脫液中的分布情況研究。為有效的方式是SDS/PAGE分析高效。也可以用Bradford 蛋白質(zhì)測定試劑盒，快速確定蛋白質(zhì)的含量提高，然后用SDS/PAGE分析蛋白質(zhì)的分布機構。
11) 目標蛋白質(zhì)需要進一步純化需要根據(jù)蛋白質(zhì)的用途確定。 12) 純化的目標蛋白質(zhì)需要復性交流，復性常用的手段可以參考有關手冊確定的原則基礎。
GuNTA-0 、20還不大、40高產、60、100發揮作用、500Buffer分別為濃度20 mM Tris-HCl pH7.9, 0.5 M NaCl, 10% Glycerol,6 M Guanidium HCl添加0良好、20、40銘記囑托、60引領、100、500 mM Imidazole開放以來。
C. NTA樹脂的再生 NTA樹脂在使用若干次數(shù)（3-5次）后占，結合效率有所下降，可以用以下方法再生提供了有力支撐，提高樹脂的使用壽命和蛋白質(zhì)的結合效率激發創作。NTA樹脂再生前需要從層析柱下端流干所有溶液前景，估計出NTA的樹脂體積，按下列次序?qū)⒃偕噭┘拥綄游鲋镌龇畲?，在等上一步再生溶液流干后大大提高，再加下一步再生溶解。用戶需要自行準?5%研究成果、50%取得了一定進展、75%、99.99%（v/v）乙醇和去離子水大面積。 從層析柱下端流干所有溶液積極參與，用2倍NTA樹脂體積的Stripping Solution I、2倍體積的去離子水培養、3倍體積的Stripping Solution II交流研討、1倍體積的25%乙醇、1倍體積的50%乙醇形式、1倍體積的75%乙醇建設應用、5倍體積的99.99%乙醇、1倍體積的75%乙醇日漸深入、1倍體積的50%乙醇動力、1倍體積的25%乙醇、1倍體積的去離子水互動式宣講、5倍體積的Stripping Solution III效高性、3倍體積的去離子水分別洗一遍。 如果立即使用自動化，用5倍體積的Ni Charging Solution洗提升，再用10倍體積的平衡溶液（NTA-0Buffer或GuNTA-0 Buffer）洗；如果想長期儲存不折不扣，加入1倍體積的20%乙醇支撐能力，4°C保存，使用前用5倍體積的Ni Charging Solution洗高效利用，再用10倍體積的平衡溶液（NTA-0Buffer或GuNTA-0 Buffer）洗
再生溶液配方：Stripping Solution I: 6M GuHCl, 0.2M acetic acid置之不顧。Stripping Solution II: 2% SDS。 Stripping Solution III: 100 mM EDTA, pH 8.0進一步提升。Ni Charging Solution: 100 mM NiSO4
