酵母總RNA提取試劑盒
適用于從酵母樣本中提取總RNA，提取的RNA可直接用于RT廣泛關註，RT-PCR生產效率，RT-qPCR新產品，普通轉(zhuǎn)錄組測序資源優勢、RACE等。酵母總RNA提取試劑盒
Yeast Total RNA Mini Kit
酵母總 RNA 快速提取試劑盒
酵母總RNA提取試劑盒
目錄號：91110
產(chǎn)品內(nèi)容
產(chǎn)品成份 | 保存 | 91110-50（50 次） |
緩沖液 SE | 室溫 | 15 ml |
Lytic Enzyme | -20℃ | 2.5 ml |
裂解液 RLT | 室溫 | 20 ml |
去蛋白液 RW1 | 室溫 | 40 ml |
漂洗液 RW | 室溫 | 10 ml（需加入指ding量無水乙醇） |
RNase-Free H2O | 室溫 | 10 ml |
RNA 吸附柱和收集管 | 室溫 | 50 套 |
RNase-Free 1.5 ml 離心管 | 室溫 | 50 支 |
RNase-Free 2.0 ml 液氮研磨管 | 室溫 | 50 支 |
自備試劑
無水乙醇管理、β-巰基乙醇
產(chǎn)品簡介
適用于從酵母樣本中提取總RNA設計，提取的RNA可直接用于RT，RT-PCR，RT-qPCR就此掀開，普通轉(zhuǎn)錄組測序長足發展、RACE等。
產(chǎn)品特點
1. 高質(zhì)：28s/18s=2:1穩步前行，OD260/280=2.0～2.2結構不合理！
2. 高效：提取全過程僅需 30 min！
操作步驟
① 第一次使用前逐步改善，請先在漂洗液 RW意見征詢，詳見瓶身的標簽。
②操作前自動化裝置，在裂解液 RLT 中加入 1% 的 β-巰基乙醇示範，例如 1ml RLT 中加入10 μl β-巰基乙醇應用前景。此裂解液最好現(xiàn)用現(xiàn)配高質量。配好的 RLT 可在 4℃放 30 天。
③吸取使用量的緩沖液 SE 加入β-巰基乙醇至終濃度 0.2%激發創作，備用前景。
提示：所有離心步驟必須在室溫（15~25℃）下進行。
1. 小量酵母培養(yǎng)細胞：
a．收集 1 ml（約 107細胞）處于對數(shù)生長期酵母培養(yǎng)物到 1.5 ml 離心管增幅最大，12,000 rpm 離心30sec共享應用，盡可能吸棄上清。
b．加入100μl緩沖液SE中（確認已經(jīng)加入 0.2% β-巰基乙醇）標準，輕柔吹打充分重懸細胞示範推廣；根據(jù)酵母量加入約 20 μl Lytic Enzyme 儲液，充分顛倒混勻即將展開，37℃溫育 15~30 min 消化細胞壁大幅增加，中間可顛倒數(shù)次幫助消化。
注意：如果破壁效果不好導(dǎo)致產(chǎn)量低傳承，可以加大 lytic Enzyme 用量來提高酶工作濃度等特點，還可以延長消化時間或者提高溫度到 45℃來提高效果，不適合 Lytic Enzyme 消化的酵母可選用其它方法如0.5mm 玻璃珠渦旋擊打 多種，反復(fù)凍融等將進一步。
c．加入 380 μl 裂解液 RLT（確認已加入 1% β-巰基乙醇），吹打混勻后用手劇烈振蕩 20 sec發展成就，充分裂解成就。
注意：一般加入裂解液后充分渦旋吹打后應(yīng)該見不到明顯團塊或者不溶物,極少數(shù)情況下如果有明顯團塊或者不溶物可以將裂解物13,000rpm 離心 3 min,沉淀不能裂解的碎片或者不溶物, 將裂解物上清全部轉(zhuǎn)到一個新離心管再進行下一步。
d．加入 280 μl 無水 乙醇開展面對面，立即吹打混勻效高性，不要離心。
e．下接步驟 3。
2. 中量酵母培養(yǎng)細胞：
a． 收集 2~3 ml（約 3X107 細胞）處于對數(shù)生長期酵母培養(yǎng)物到 1.5 ml離心管（超過 1.5 ml 可分兩次在同一個離心管內(nèi)進行收集細胞）提升，12高品質，000rpm 離心30 sec，盡可能吸棄上清支撐能力。
b． 加入300 μl緩沖液SE中（確認已經(jīng)加入β-巰基乙醇至終濃度0.2%）資源優勢，輕柔吹打充分重懸細胞；根據(jù)酵母量加入 50μl Lytic Enzyme 儲液特征更加明顯，充分顛倒混勻估算，37℃溫育 15~30 min 消化細胞壁，中間可顛倒數(shù)次幫助消化方便。
注意：如果破壁效果不好導(dǎo)致產(chǎn)量低基礎上，可以加大 lytic Enzyme 用量來提高酶工作濃度，還可以延長消化時間或者提高溫度到 45℃來提高效果應用領域，不適合Lytic Enzyme消化的酵母可選用其它方法如0.5mm玻璃珠渦旋擊打 保持競爭優勢，反復(fù)凍融等。
c． 13,000 rpm 離心 1 min發展機遇，盡可能吸棄上清長效機製。
d． 加入350μl裂解液RLT（確認已經(jīng)加入 β-巰基乙醇至終濃度 1%），吹打混勻后用手劇烈振蕩20sec全技術方案，充分裂解分享。
注意：一般加入裂解液、充分渦旋吹打后信息化，應(yīng)該見不到明顯團塊或者不溶物方式之一。極少數(shù)情況下，如果有明顯團塊或者不溶物新型儲能，可以將裂解物13,000 rpm 離心 3 min創新能力，沉淀不能裂解的碎片或者不溶物, 將裂解物上清全部轉(zhuǎn)到一個新離心管再進行下一步。
e． 加入等體積 70％乙醇（DEPC 水配制領域，約 350μl）立即吹打混勻溝通機製。
f． 下接步驟 3。
3. 將≤750μl 上清混合液加入 RNA 吸附柱中註入新的動力，13,000 rpm 離心 1 min領先水平，倒棄濾液。此時雙重提升，RNA 被吸附在膜上戰略布局。重復(fù)此過程，直到溶液全部上柱表現明顯更佳。
4. 加入 700 μl 去蛋白液 RW1狀態，室溫放置 1min技術節能，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液廣泛認同。
5. 加入 500μl 漂洗液 RW國際要求，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液鍛造。
6. 重復(fù)步驟 5 一次重要部署。
7. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 離心 2 min工具，除去乙醇智慧與合力。
8. 取出 RNA 吸附柱，放入 RNase-free1.5 ml 離心管中重要的角色，向 RNA 吸附膜的中央部位懸空滴加30-50μl RNase-free H2O開放要求，室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 1 min平臺建設。
9. 提取的總 RNA服務機製，可直接用于下游實驗，或于-70℃保存推動並實現，以免降解薄弱點。
相關(guān)產(chǎn)品：
71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）
71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）
71711-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有qPCR儀)
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