動(dòng)物組織/細(xì)胞microRNA快速提取試劑盒
FlashPure Tissue/Cell miRNA Mini Kit（免氯仿）是通用型 microRNA快速提取試劑盒（Cat91015）的升級版，專用于提取各種動(dòng)物組織品牌、細(xì)胞的miRNA（包含 miRNA 的總 RNA），提取過程不再需要使用氯仿傳遞，并采用du有的 gDNA 過濾器動(dòng)物組織/細(xì)胞microRNA快速提取試劑盒
FlashPure Tissue/Cell miRNA Mini Kit
動(dòng)物組織/細(xì)胞 microRNA 快速提取試劑盒（免氯仿）
動(dòng)物組織/細(xì)胞microRNA快速提取試劑盒
目錄號：91409
產(chǎn)品內(nèi)容
產(chǎn)品成份 | 91409-50（50 次） |
裂解液 MRL Plus | 25 ml |
Wash Solution 1 | 12 ml（需加入指ding量無水乙醇） |
Wash Solution 2/3 | 10 ml（需加入指ding量無水乙醇） |
RNase-Free ddH2O | 5 ml |
gDNA 過濾器和收集管 | 50 套 |
RNA 吸附柱和收集管 | 50 套 |
RNase-Free 1.5ml 離心管 | 50 支 |
RNase-Free 2.0ml 液氮研磨管 | 50 支 |
自備試劑
無水乙醇
保存條件
室溫（15 ~ 25℃）
產(chǎn)品簡介
FlashPure Tissue/Cell miRNA Mini Kit（免氯仿）是通用型 microRNA快速提取試劑盒（Cat91015）的升級版大型，專用于提取各種動(dòng)物組織、細(xì)胞的miRNA（包含 miRNA 的總 RNA）總之，提取過程不再需要使用氯仿面向，并采用du有的 gDNA 過濾器，高效濾除基因組研學體驗，得到包含 miRNA 的總 RNA建設項目，可直接用于 miRNA 和 mRNA 的 RT、RT-PCR落實落細、RT-qPCR相結合、RACE、芯片製高點項目、測序等為產業發展。
但是，市場上常見的離心柱型的 RNA Kit/總 RNA Kit有所增加，不能有效吸附回收 miRNA各項要求；Trizol 沉淀抽提法也不能有效沉淀回收全部 miRNA（生物通上有專題文章闡述）。
注意事項(xiàng)
1. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融估算，否則會影響 RNA 的提取得率和質(zhì)量講理論。
2. 樣品加入裂解液 MRL Plus 勻漿后，樣品可在–80℃保存一個(gè)月以上不要畏懼。
3. RNA 在裂解液 MRL Plus 中時(shí)不會被 RNase 降解服務為一體，但后續(xù)處理過程中應(yīng)使用不含 RNase 的吸頭和器皿。
4. 取RNA樣本時(shí)逐漸顯現，把新鮮組織樣本浸入 RNAsafe (RNA 樣品保存液要落實好，91115-100)中，可在 37℃保存一天，在 25℃保存一周先進技術，在 4℃保存一個(gè)月培訓，在-20℃或者–80℃長期保存。
重要提示：
① shou次使用前, 先在 Wash Solution 1宣講手段、Wash Solution 2/3重要工具、70%乙醇
中加入指ding量無水乙醇，詳見瓶上的標(biāo)簽配套設備。
② 所有離心步驟均需要在室溫（15~37℃）下進(jìn)行更優質，提取效果更佳！
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)
操作步驟
1. 動(dòng)物組織：
a．電動(dòng)勻漿：取新鮮組織 10~20 mg 加入 500 μl 裂解液 MRL Plus推進高水平，電動(dòng)勻漿脫穎而出，直到無明顯組織塊即可。
b．液氮研磨：液氮研磨組織成細(xì)粉生產創效，取 10~20 mg 組織細(xì)粉加入500μl 裂解液 MRL Plus結構，劇烈渦旋振蕩，直到無明顯粉末團(tuán)即可優化上下。
c． 將裂解物 13,000 rpm 離心 3 min能力建設，沉淀不能裂解的碎片。下接操作步驟 3生產體系。
2. 細(xì)胞
a. 懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞服務，加 500 μl 裂解液 MRL Plus（<8x106 細(xì)胞）, 吹打混勻，劇烈渦旋振蕩20秒能力和水平，充分裂解覆蓋。
b. 貼壁細(xì)胞：不需要消化，吸棄培養(yǎng)基后研究，直接在培養(yǎng)皿中加裂解液MRL Plus（每<8x106細(xì)胞加500μl 裂解液 MRL Plus）進(jìn)行消化增持能力、裂解； 或者行業內卷，先用胰mei消化后離心收集細(xì)胞，然后加入裂解液 MRL Plus逐漸完善，吹打混勻參與能力，劇烈渦旋振蕩 20 秒，充分裂解是目前主流。
c. 下接操作步驟 3充分發揮。
3. 將裂解勻漿物（或離心得到的上清）全部加入gDNA過濾器中（過濾器放入收集管中），13,000 rpm 離心 1 min充分發揮，保留濾液（RNA 在濾液中）選擇適用。
4. 向?yàn)V液中加入 1.25 倍體積的無水乙醇，用移液器吹打混勻。
5. 每次轉(zhuǎn)移≤750 μl濾液混合物至RNA吸附柱中業務指導，13,000 rpm離心1min改進措施，此時(shí)，RNA 被吸附在膜上長足發展，棄濾液今年。重復(fù)此過程，直到溶液全部上柱結構不合理。
6. 加入 700 μl Wash Solution 1（檢查是否已加入乙醇）動手能力，室溫放置 1 min, 13,000 rpm 離心30sec，棄濾液意見征詢。
7. 加入 500 μl Wash Solution 2/3（檢查是否已加入乙醇）提升，13,000 rpm 離心 30 sec，棄濾液的必然要求。
8. 重復(fù)步驟 7研究成果。
9. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 離心 2 min運行好，除去膜上殘留的留乙醇首次。
10. 取出 RNA 吸附柱，放入一個(gè)新的 RNase-free 1.5 ml 離心管中部署安排，向 RNA吸附膜的中央懸空滴加 30-50 μl RNase-free H2O搖籃， 室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 1 min生產能力，管底即包含 miRNA 的總 RNA標準。
11. 得到 RNA/miRNA，可直接用于下游實(shí)驗(yàn)堅持好，或于-70℃保存即將展開，以免降解。
相關(guān)產(chǎn)品：
71418-25 Script III miRNA 1st Stand Synthesis Kit（加尾法）
71419-500 Script III miRNA Real-Time PCR Assay kit（for qPCR特性，加尾法）
71613-500 Script III miRNA RT-qPCR Detection kit（71418-25 + 71419-500）
附錄：
microRNA 富集方法（僅僅提取 microRNA傳承，不包含>200 nt 其它總 RNA成份。一般不推薦）
注意：當(dāng)非特異擴(kuò)增較多或者擴(kuò)增背景較高時(shí)建言直達，可以嘗試使用富集方法提取的 microRNA多種。
1. 按照前面步驟 1、2 操作充分發揮，直到得到上清或者裂解物發展成就。
2. 向上清或者裂解物中加入 0.5 倍體積的無水乙醇（必須是室溫的），吹打混勻重要方式。
3. 將全部混合液加入一個(gè) gDNA 過濾器中開展面對面， 13,000 rpm 離心 1 min系統，收集濾液（microRNA 在濾液中）。
此時(shí)進一步提升，RNA 吸附柱的膜上是去除了 microRNA 的總 RNA（mRNA空間廣闊、tRNA、rRNA）不折不扣，如果有需要支撐能力，可以按照前面標(biāo)準(zhǔn)操作步驟 6－10 操作，經(jīng)漂洗高效利用、洗脫后特征更加明顯，得到去除了 microRNA 的總 RNA。
4. 較精確估計(jì)濾液體積講理論，加入等體積的無水乙醇（必須是室溫的）的可能性，吹打混勻，不要離心服務為一體。
5. 每次轉(zhuǎn)移≤750 μl濾液混合物至RNA吸附柱中問題，13,000 rpm離心1 min，micoRNA 被吸附在膜上全會精神，倒棄濾液系統穩定性。重復(fù)此過程，直到所有濾液混合物都上柱法治力量。
6. 按照前面標(biāo)準(zhǔn)操作步驟 6－10全技術方案，經(jīng)漂洗，洗脫后共享，得到 microRNA信息化。
動(dòng)物組織/細(xì)胞microRNA快速提取試劑盒
