全血（液體樣本）microRNA快速提取試劑盒
常見的離心柱型的 RNA Kit/總 RNA Kit 不能有效吸附回收 miRNA體系流動性，Trizol 抽提法也不能有效沉淀回收 miRNA（生物通上有專題文章闡述）。全血（液體樣本）microRNA快速提取試劑盒
Blood miRNA Mini Kit
全血（液體樣本）microRNA 快速提取試劑盒
全血（液體樣本）microRNA快速提取試劑盒
目錄號：91214
產(chǎn)品內(nèi)容
產(chǎn)品成份 | 91214-50（50 次） |
裂解液 RLS | 50 ml |
Wash Solution 1 | 12 ml（需加入指ding量無水乙醇） |
Wash Solution 2/3 | 10 ml（需加入指ding量無水乙醇） |
70%乙醇 | 9 ml（需加入指ding量無水乙醇） |
RNase-Free ddH2O | 5 ml |
RNA 吸附柱和收集管 | 50 套 |
microRNA 吸附柱和收集管 | 50 套 |
RNase-Free 1.5ml 離心管 | 50 支 |
自備試劑
無水乙醇
保存條件
室溫（15 ~ 25℃）
產(chǎn)品簡介
常見的離心柱型的 RNA Kit/總 RNA Kit 不能有效吸附回收 miRNA研究成果，Trizol 抽提法也不能有效沉淀回收 miRNA（生物通上有專題文章闡述）取得了一定進展。
裂解液 RLS 是 RNAzol LS Reagent ( 同 Trizo LS ,是濃縮型的 Trizol )，配合 miRNA 專用的溶液體系大面積，專用于快速提取全血積極參與、血漿、血清培養、腦脊液交流研討、尿液等液體樣本的 miRNA 和其它各種小 RNA(15-30 nt )。
Blood miRNA Mini Kit 可以提出來包含 miRNA 的總 RNA形式，用于miRNA 的 RT應用的選擇、qPCR 檢測，以及全轉(zhuǎn)錄組測序等左右；根據(jù)需要背景下，也可以一次性把 miRNA和總RNA（mRNA、tRNA可靠保障、rRNA）分別提出來自然條件。
產(chǎn)品特點
1. 本公司生產(chǎn)的Blood miRNA mini Kit質(zhì)量優(yōu)異，可以媲美進口品牌多種。
2. 本品可在常溫下提取 RNA將進一步，不需要 4℃離心機；亦可以兼容 4℃離心機發展成就。
注意事項
1. Wash Solution 2/3 可能加入乙醇使用幾天后成就，可能會出現(xiàn)沉淀晶體，并不影響使用開展面對面，取其上清直接使用就可以系統。
2. 血液 RNA 的常溫保存/運輸/提取的簡易方案：
臨床取樣：在臨床上，使用抗凝管采血后進一步提升，取250μl新鮮血液空間廣闊，加入 750μl 的裂解液 RLS ( RNAzol LS Reagent，Cat#91012-100)改革創新，用移液槍反復抽打并振蕩混勻知識和技能，在室溫裂解 5~10 min，直至血細胞充分發(fā)生裂解新模式。
保存：經(jīng)裂解后的血液可在-20℃下保存 1-2 個月實現，在-70℃保存半年。
運輸：可冰袋 4℃運輸 1 天組織了，干冰-20℃運輸一周服務體系。
提取：后續(xù)RNA提取按 R213（或 R012）的說明書進行搶抓機遇。
3. RNA 純度及濃度檢測:
血清/血漿的 RNA 含量特別低分析，已經(jīng)低于分光光度計測量的下限，無法準確測量全面闡釋，因此無法通過測量 OD 值或者比值的方法來判斷濃度或者純度非常激烈，只能通過下游做 RT-qPCR 來判斷產(chǎn)量。同時無細胞的血清/血漿中的 RNA 主要是小于 100 nt 的 miRNA集中展示，因此跑電泳檢測 RNA 完整性并不適用于血清/血漿 RNA全技術方案。
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準
操作步驟
第一次使用前，先在 Wash Solution 1共享、Wash Solution 2/3信息化、70%乙醇中加入無水乙醇，加入量詳見瓶上的標簽生動。
1. 每 250 μl 液體樣品 (血清新型儲能、血漿、腦脊液等)新品技，加入 750 μl 裂解液 RLS範圍，用移液器反復抽打幾次，然后劇烈震蕩 15 sec紮實做，充分混勻空間廣闊。（液體樣品和裂解液 RLS 的終體積比總是 1：3）
注意：對于含有高污染物樣品（如全血樣品）至關重要，可以用滅菌水按照 1：1的比例稀釋一倍后開始提取。
2. 將勻漿樣品在室溫下放置 5 min服務品質，使得核酸蛋白復合物wan全分離的發生。
3. 加入 200 μl 氯仿，劇烈振蕩 15 秒影響，并在室溫下放置 2 分鐘新的動力。
4. 于 4℃（或室溫）13，000 rpm 離心 10 分鐘發展契機。 樣品會分成三層：下層有機相廣泛關註、中間層、上層無色的水相發力，RNA 存在于水相中優勢領先。水相層的容量大約為所加裂解液 RLS 體積的 70%。
5. 轉(zhuǎn)移上清（約 500 μl）至一個新的離心管中共創美好，加入 1.5 倍體積（750 μl）的無水乙醇改善，吹打混勻。
6. 每次轉(zhuǎn)移≤750 μl上清混合液至RNA吸附柱中協調機製，12,000 rpm離心1 min信息化，倒棄濾液。重復此過程實踐者，直到上清混合液全部上柱取得明顯成效。
7. 向 RNA 吸附柱內(nèi)加入 700 μl Wash Solution 1（檢查是否已加入乙醇），12,000 rpm 離心 1 min貢獻力量，倒棄濾液使用。
8. 向 RNA吸附柱內(nèi)加入 500 μl Wash Solution 2/3（檢查是否已加入乙醇），12,000 rpm離心1 min發行速度，棄濾液更加堅強。
9. 重復步驟 8 一次。
10. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中性能，12,000 rpm 離心 2min初步建立，除去膜上殘留的乙醇。
11. 取出 RNA 吸附柱供給，放入一個新的 RNase-Free 1.5 ml 離心管中的方法，向吸附膜的中央部位懸空滴加 30~50 μl RNase-Free ddH2O，室溫放置 1 min進行探討，12,000 rpm 離心 1 min落到實處，管底即包含 microRNA 的總 RNA。
附：microRNA 富集方法（僅僅提取 microRNA最新，不包含>200 nt 其它總RNA 成份技術創新。一般不推薦）
注意：當非特異擴增較多或者擴增背景較高時處理方法，可以嘗試使用富集方法提取的 microRNA。
1. 按照前面標準操作步驟 1－4 操作持續向好，直到得到上清活動上。
2. 取上清（約 500 μl）至一個新的離心管，加入等體積 70％乙醇（必須是室溫的）進一步推進，吹打混勻，不要離心方案。
3. 取700 μl上清混合液應用的選擇，加入一個RNA吸附柱中，12,000 rpm離心1 min左右，收集濾液背景下。并將濾液轉(zhuǎn)移至一個新的離心管，然后把 RNA 吸附柱放回空的收集管內(nèi)可靠保障，再加入剩下的混合物自然條件，離心，收集濾液開展。
此時互動互補，濾液含有 microRNA, RNA 吸附柱的膜上是去除了 microRNA 的總RNA（mRNA、tRNA提單產、rRNA 等大于 200nt 的 RNA）深入實施，如果有需要，可以按照前面標準操作步驟 7－11 操作發展空間，漂洗效果、洗脫，得到去除了 microRNA 的總 RNA足了準備。
4. 較精確估計濾液體積合作關系，加入 0.65 倍體積無水乙醇（必須是室溫的），吹打混勻深刻內涵，不要離心傳遞。
5. 將≤750 μl濾液混合物加入microRNA吸附柱中，12,000 rpm離心1min深入闡釋，micoRNA 被吸附在膜上更加廣闊，倒棄廢液。重復此過程提高，直到所有溶液都上柱可以使用。
6. 按照前面標準操作步驟 7－11 操作，經(jīng)漂洗紮實，洗脫后效高化，得到富集的microRNA新體系。
相關(guān)產(chǎn)品：
71418-25 Script III miRNA 1st Stand Synthesis Kit（加尾法）
71419-500 Script III miRNA Real-Time PCR Assay kit（for qPCR，加尾法）
71613-500 Script III miRNA RT-qPCR Detection kit（P418-25 + P419-500）
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