PAX Blood microRNA Kit 核酸提取
PAX Blood miRNA Kit設計用于從儲存在保存試劑和PAXgene®中的血液樣品中分離總RNA>18個核苷酸（包括miRNA）;血液 RNA 管。該程序可wan全去除污染物和酶抑制劑創新延展，從而產(chǎn)生高質(zhì)量的 RNA相對較高。使用 PAX Blood miRNA 試劑盒純化的 RNA 可直接用于 RT-PCR 等應用集中展示。PAX Blood microRNA Kit 核酸提取
PAX Blood miRNA Kit (For PAXgene Blood RNA Tube)
PAX Blood microRNA Kit 核酸提取
目錄號：91511
產(chǎn)品簡介
PAX Blood miRNA Kit設計用于從儲存在保存試劑和PAXgene®中的血液樣品中分離總RNA>18個核苷酸（包括miRNA）;血液 RNA 管模式。該程序可wan全去除污染物和酶抑制劑，從而產(chǎn)生高質(zhì)量的 RNA合理需求。使用 PAX Blood miRNA 試劑盒純化的 RNA 可直接用于 RT-PCR 等應用是目前主流。
從保存試劑中取出樣品。對于儲存在 PAXgene 中的血液樣本®血液 RNA 管高質量，通過離心收集細胞充分發揮。樣品在含有蛋白酶 K 的優(yōu)化緩沖液下洗滌和裂解。將樣品離心以去除細胞碎片和其他顆粒管理。用異丙醇調(diào)整結(jié)合條件后的特性，將樣品上樣到 RNA 結(jié)合柱上。通過短暫的離心或真空步驟基礎，樣品通過結(jié)合 RNA/miRNA 的柱基質(zhì)。經(jīng)過三個洗滌步驟后還不大，用不含 RNase 的水洗脫純化的 RNA/miRNA高產。
產(chǎn)品特點
配套PAXgene采血/RNA保存管提取血液microRNA
Kit Contents and Storage
Kit Contents | Storage | 50 Preps (91511-50) |
Resuspension Buffer | RT | 20 ml |
Binding Buffer | RT | 50 ml |
WashSolution 1 | RT | 12 ml Add indicated ethanol before first use |
WashSolution 2/3 | RT | 10 ml Add indicated ethanol before first use |
RNase-free H2O | RT | 10 ml |
DNase Buffer | –20 °C | 1.25 ml x 2 |
RNase free DNase I | –20 °C | 250 μl |
Proteinase K (20mg / ml) | –20 °C | 20 mg x 1 tube |
RNA Binding Columns | RT | 50 |
注意：蛋白酶 K 是一種凍干物。離心幾秒鐘發揮作用，然后用 1 ml 蒸餾水等分溶液復溶良好。在 –20 °C 下儲存逐步顯現。 避免反復凍融。所有試劑在指ding溫度下儲存時引領，可穩(wěn)定保存 9 個月自動化裝置。
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準
描述
PAX Blood miRNA Kit設計用于從儲存在保存試劑和PAXgene® Blood RNA Tube中的血液樣本中分離總RNA>18個核苷酸（包括miRNA）。該程序可wan全去除污染物和酶抑制劑應用前景，從而產(chǎn)生高質(zhì)量的 RNA有很大提升空間。使用 PAX Blood miRNA 試劑盒純化的 RNA 可直接用于 RT-PCR 等應用。
從保存試劑中取出樣品激發創作。對于儲存在 PAXgene® Blood RNA Tubes 中的血液樣本前景，通過離心收集細胞。樣品在含有蛋白酶 K 的優(yōu)化緩沖液下洗滌和裂解增幅最大。將樣品離心以去除細胞碎片和其他顆粒共享應用。用異丙醇調(diào)整結(jié)合條件后，將樣品上樣到 RNA 結(jié)合柱上標準。通過短暫的離心或真空步驟示範推廣，樣品通過結(jié)合 RNA/miRNA 的柱基質(zhì)。經(jīng)過三個洗滌步驟后即將展開，用不含 RNase 的水洗脫純化的 RNA/miRNA大幅增加。
用戶提供的材料和設備：
1. 微量離心機的離心能力為 13,000 x g
2. 100% 異丙醇
3. 不含 RNase 的過濾移液器吸頭
4. 不含 RNase 的水
5. 1.5 或 2.0 ml 微量離心管
6. 搖動培養(yǎng)箱或加熱塊，溫度可達 55°C培養、65°C
7. 帶水平轉(zhuǎn)子的離心機交流研討，離心力可達 5,500 x g
注意：
shou次使用前，將規(guī)定量的乙醇加入洗滌液中
溶液 1 和洗滌溶液 2/3 瓶形式，充分混合建設應用，并用勾號標記瓶子。
將培養(yǎng)箱或加熱塊加熱至 55°C日漸深入。
1. 使用水平轉(zhuǎn)子以 3,000-5,000 x g 的離心力離心 PAXgene® Blood RNA 管 10 分鐘動力。
2. 吸出并丟棄上清液。
3. 加入 4 mL 不含 RNase 的水互動式宣講。渦旋以wan全重懸沉淀效高性。
4. 使用水平轉(zhuǎn)子以 3,000-5,000 x g 的離心力離心 PAXgene® Blood RNA Tube 10 分鐘。
5. 吸出并丟棄上清液自動化。
注意：不wan全去除上清液會降低裂解效率并稀釋裂解物提升，從而降低 RNA 產(chǎn)量。
6. 加入 350 μl 重懸緩沖液不折不扣。渦旋以wan全重懸沉淀支撐能力。
7. 將樣品轉(zhuǎn)移到新的 1.5 ml 微量離心管中。
8. 加入 300 μL 結(jié)合緩沖液和 20 μL 蛋白酶 K 溶液高效利用。渦旋 5 秒鐘以充分混合特征更加明顯。
9. 使用振蕩培養(yǎng)箱在 55°C 下孵育 10 分鐘估算。
10. 可選：將裂解物通過安裝在注射器上的 20 號針頭（直徑 0.9 mm）至少 5 次，或使用電子組織勻漿器勻漿的可能性。此步驟剪切基因組 DNA不要畏懼，降低裂解物的粘度，并提高產(chǎn)量應用領域。
11. 將勻漿以 13,000 rpm 離心 3 min保持競爭優勢。將上清液轉(zhuǎn)移到新的離心管中。
12. 加入等體積的 100% 異丙醇實現。渦旋充分混合不容忽視。
13. 將最多 700 μl 混合物轉(zhuǎn)移至 2 ml 收集管（提供）中的 RNA 結(jié)合柱中。
14. 以最大速度離心 1 分鐘服務體系。
15. 吸出并丟棄濾液說服力，重復使用收集管。
16.重復步驟 13-15分析，直到剩余樣品轉(zhuǎn)移到 RNA 結(jié)合柱中表示。
17. 加入 350 μl 洗滌液 1.
18. 以最大速度離心 1 分鐘。
19. 吸出并丟棄濾液非常激烈，重復使用收集管競爭力所在。
20. 對于每個 RNA 結(jié)合柱，準備 DNase I 消化
反應混合物如下：
Buffer | Volume per Prep | 10 Preps |
DNase I Buffer | 45 μl | 450 μl |
RNase-free DNase I | 5 μl | 50 μl |
Total volume | 50 μl | 500 μl |
重要說明：
• DNase I 非常敏感領域，容易發(fā)生物理變性溝通機製。不要渦旋 DNase I 混合物。倒置試管輕輕混勻註入新的動力。
• 在 RNA 分離之前新鮮制備 DNase I 儲備液領先水平。
• 標準 DNase 緩沖液與膜上 DNase I 消化不兼容。使用其他緩沖液可能會影響 RNA 與基質(zhì)的結(jié)合雙重提升，并可能降低 RNA 產(chǎn)量和純度戰略布局。
• 所有步驟必須在室溫下進行”憩F明顯更佳？焖俚⌒牡毓ぷ鳡顟B。
21. 將 50 μl DNase I 消化反應混合物直接移液到 RNA 結(jié)合柱的中心表面。
注意：確保將 DNase I 消化混合物直接移液到膜上指導。如果一些混合物保留在 RNA 結(jié)合柱的壁或 O 形圈上廣泛認同，則 DNase I 消化將不wan全
22. 在室溫下靜置 15 分鐘。
23. 加入 350 μl 洗滌液 1.以最大速度離心 1 分鐘流動性。
24. 吸出并丟棄濾液鍛造，重復使用收集管。
25. 加入 500 μl 洗滌液 2/3追求卓越。以最大速度離心 1 分鐘逐漸完善。
26. 吸出并丟棄濾液，重復使用收集管發展契機。
27. 重復步驟 25-26 進行第二個洗滌液 2/3 洗滌步驟廣泛關註。
28. 以最大速度離心空的 RNA 結(jié)合柱 2 分鐘，以干燥柱基質(zhì)發力。
注意：洗脫前干燥柱膜很重要優勢領先。
殘留的乙醇可能會干擾下游應用。
29. 將 RNA 結(jié)合柱轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 微量離心管中共創美好。
30. 將 50-70 μl 不含 RNase 的水直接加入到膜中心（可選：將水預熱至 70–90°C 將增加 RNA 產(chǎn)量）推動並實現。在室溫下靜置 1 分鐘。
31. 以最大速度離心 2 分鐘覆蓋範圍。
PAX Blood microRNA Kit 核酸提取
