動物組織/細胞RNA/ DNA共提試劑盒 核酸提取
Tissue/Cell RNA/ miRNA /DNA /Protein Mini Kit（免lv仿）適用于從各種動物組織生產體系、細胞中同時提取出 RNA/miRNA（包含 miRNA 的總 RNA）、基因組 DNA 和 Protein很重要，提取全程不需要使用lv仿能力和水平，得到包含 miRNA 的總RNA，不需要 DNase I 消化動物組織/細胞RNA/ DNA共提試劑盒 核酸提取
Tissue/Cell RNA/ miRNA /DNA /Protein Mini Kit
動物組織/細胞 RNA/ miRNA/DNA/ Protein 共提試劑盒（免lv仿）
動物組織/細胞RNA/ DNA共提試劑盒 核酸提取
目錄號：91417
產(chǎn)品內容
產(chǎn)品成份 | 91417-50（50 次） |
裂解液 MRL Plus | 50 ml |
Wash Solution 1 | 12 ml（需加入zhi定量無水乙chun） |
Wash Solution 2/3 | 10 ml（需加入zhi定量無水乙chun） |
RNase-Free ddH2O | 5 ml |
抑制物去除液 IR | 25 ml |
漂洗液 WB | 13 ml（需加入zhi定量無水乙chun） |
緩沖液 APP | 60 ml |
洗脫緩沖液 EB | 10 ml |
gDNA 吸附柱和收集管 | 50 套 |
RNA 吸附柱和收集管 | 50 套 |
RNase-Free 1.5ml 離心管 | 50 支 |
RNase-Free 2.0ml 液氮研磨管 | 50 支 |
自備試劑
無水乙chun
保存條件
室溫（15 ~ 25℃）
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準
產(chǎn)品簡介
Tissue/Cell RNA/ miRNA /DNA /Protein Mini Kit（免lv仿）適用于從各種動物組織異常狀況、細胞中同時提取出 RNA/miRNA（包含 miRNA 的總 RNA）研究、基因組 DNA 和 Protein，提取全程不需要使用lv仿應用創新，得到包含 miRNA 的總RNA提高，不需要 DNase I 消化，可直接用于 miRNA 和 mRNA 的 RT的特性、RT-PCR交流、RT-qPCR、RACE信息化、芯片形勢、測序等∪〉妹黠@成效；蚪M DNA 也可以直接用于下游的Southern約定管轄、mei切、PCR 等各種試驗創新的技術。
du特的裂解液迅速裂解細胞和滅活細胞 RNase/DNase業務指導，然后裂解混合物 RNA/miRNA/ DNA/Protein 同時通過一個 gDNA 吸附柱，基因組 DNA被吸附而 miRNA/RNA/Protein 穿透濾過就此掀開。gDNA 吸附柱上的基因組 DNA經(jīng)過一系列漂洗長足發展、洗脫后得到純凈基因組 DNA。濾過的 RNA/miRNA穩步前行，先用乙chun調節(jié)結合條件結構不合理，然后轉入 RNA 吸附柱，在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于RNA 吸附柱上逐步改善，接著通過一系列快速的離心-漂洗-離心-洗脫意見征詢，得到純凈的RNA/miRNA（包含 miRNA 的總 RNA）。濾液經(jīng)選擇性沉淀得到 Protein大大提高。
注意事項
1. 采集 RNA 樣本時的必然要求，把新鮮組織樣本浸入 RNAsafe (RNA 樣品保存液， 91115-100) 中取得了一定進展，可在 37℃保存一天完善好，在 25℃保存一周，在 4℃保存一個月積極參與，在-20℃或者–80℃長期保存問題分析。
2. 樣品應避免反復凍融培養，否則會影響 RNA 的提取得率和質量。
3. 提取時更加完善，RNA 在裂解液 MRL Plus 中時不會被 RNase 降解形式，但后續(xù)處理過程中應使用不含 RNase 的吸頭和器皿。
4. 樣品在加入裂解液 MRL Plus 并勻漿后支撐作用，可在–80℃保存一個月以上日漸深入。
5. Wash Solution 2/3 可能加入乙chun使用幾天后，可能會出現(xiàn)沉淀晶體綜合措施，并不影響使用可靠保障，取其上清直接使用就可以。
重要提示：
① 第一次使用前, 請先在 Wash Solution 1建言直達、Wash Solution 2/3多種、漂洗液 WB 中加入zhi定量無水乙chun，詳見瓶上的標簽充分發揮。
② 所有離心步驟均需要在室溫（15~37℃）下進行發展成就，提取效果更佳！
操作步驟
1. 動物組織：
a．電動勻漿：取新鮮組織 10~20 mg 加入 500 μl 裂解液 MRL Plus重要方式，電動勻漿開展面對面，直到無明顯組織塊即可。
b．液氮研磨：液氮研磨組織成細粉非常重要，取 10~20 mg 組織細粉加入500μl 裂解液 MRL Plus進一步提升，劇烈渦旋振蕩，直到無明顯粉末團即可營造一處。
c． 將裂解物 13,000 rpm 離心 3 min改革創新，沉淀不能裂解的碎片。
d．下接操作步驟 3取得顯著成效。
2. 細胞
a. 懸浮細胞：離心收集細胞新模式，加 500 μl 裂解液 MRL Plus（<8x106 細胞）, 吹打混勻，劇烈渦旋振蕩 20 sec不容忽視，充分裂解組織了。
b. 貼壁細胞：不需要消化，吸棄培養(yǎng)基后說服力，直接在培養(yǎng)皿中加裂解液MRL Plus（每<8x106細胞加 500 μl 裂解液 MRL Plus）進行消化搶抓機遇、裂解；或者表示，先用胰mei消化后離心收集細胞全面闡釋，然后加入裂解液 MRL Plus，吹打混勻拓展基地，劇烈渦旋振蕩 20 sec集中展示，充分裂解實力增強。
c. 下接操作步驟 3體系流動性。
3. 將裂解勻漿物（或離心得到的上清）全部加入 gDNA 吸附柱中（吸附柱放入收集管中）探索創新，13,000 rpm 離心 1 min，基因組 DNA 被吸附在膜上方式之一，保留濾液（RNA/ miRNA/Protein 在濾液中）生動。
把 gDNA 吸附柱放入 2.0 ml 離心管，置于 4℃度創新能力，以備提取 DNA 用新品技。
以下是 RNA/miRNA 的提取步驟：（包含 miRNA 的總 RNA）
4. 向濾液中加入 1.25 倍體積的無水乙chun，用移液器吹打混勻求得平衡。
5. 每次轉移≤750 μl濾液混合物至RNA吸附柱中紮實做，13,000 rpm離心1min，此時至關重要，RNA 被吸附在膜上提供深度撮合服務，保留濾液，以備提取 Protein的發生。
濾液中含有 Protein組成部分，請轉入一個合適大小（至少 2 倍濾液體積）的離心管新的動力，用于步驟 18 開始的 Protein 提取的過程中。
6. 加入 700 μl Wash Solution 1（檢查是否已加入乙chun），室溫放置 1 min, 13,000 rpm 離心 30 sec廣泛關註，倒棄濾液促進進步。
7. 加入 500 μl Wash Solution 2/3（檢查是否已加入乙chun），13,000 rpm 離心 30 sec優勢領先，倒棄濾液迎來新的篇章。
8. 重復步驟 7。
9. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中改善，13,000 rpm 離心 2 min空白區，除去膜上殘留的乙chun。
10. 取出 RNA 吸附柱信息化，放入 RNase-free 1.5 ml 離心管中形勢，向 RNA 吸附膜的中央部位懸空滴加 30~50 μl 的 RNase-free H2O，室溫放置 1 min取得明顯成效，13,000 rpm 離心 1 min約定管轄，管底即包含 miRNA 的總 RNA。
11. 得到 RNA/miRNA創新的技術，可直接用于下游實驗發揮，或于-70℃保存顯著，以免降解。
以下步驟為提取 DNA 步驟：
12. 向步驟 3 的 gDNA 吸附柱中與時俱進，加入 500μl 抑制物去除液 IR性能，12,000 rpm離心 30 sec，倒棄濾液綜合運用。
13. 加入700 μl漂洗液WB（檢查是否已加入乙chun）供給，12,000 rpm離心30sec，倒棄濾液實事求是。
14. 加入 500 μl 漂洗液 WB進行探討，12,000rpm 離心 30 sec，倒棄濾液服務水平。
15. 將 DNA 吸附柱放回空收集管中最新，13,000rpm 離心 2 min，盡量除去漂洗液處理方法，以免漂洗液中殘留乙chun抑制下游反應重要作用。
16. 取出 gDNA 吸附柱，放入新的 1.5 ml 的離心管中活動上，向吸附膜的中央懸空滴加 100 μl 洗脫緩沖液 EB（洗脫緩沖液事先在 65~70℃水浴中預熱效果更好）有望，室溫放置 3~5 min，12,000 rpm 離心 1 min導向作用。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中方案，室溫放置 2 min，12,000 rpm 離心 1 min十大行動。
17. 得到的DNA可以存放在2~8℃左右，如果要長時間存放，可以放置在- 20℃綜合措施。
以下步驟為提取 Protein 步驟：
18. 向步驟 5 的濾液中加入等體積的緩沖液 APP可靠保障，渦旋振蕩混勻，室溫放置15 min 沉淀 Protein設計標準。
19. 13,000 rpm 離心 5~10 min開展，小心棄上清。加入 0.5ml 70%乙chun發揮重要帶動作用，顛倒混勻后意向，離心 1 min，小心棄上清文化價值，留下蛋白沉淀發展空間，盡量將殘留液體用移液器吸干凈。
20. 室溫晾干沉淀 5~10 min，注意一定讓乙chun揮發(fā)干凈足了準備，以免影響下游試驗合作關系。
21. 將蛋白沉淀溶解于 30~150 μl 1x 蛋白上樣緩沖液（如需要蛋白定量，緩沖液中不應該加入溴fen蘭）或其它下游試驗要求的緩沖液中深刻內涵。
由于裂解液 MRL Plus 強變性作用或者不同蛋白等電點傳遞，蛋白可能溶解比較困難，用移液器吹打幫助溶解或者改變 PH 值幫助蛋白溶解交流等，短暫離心取上清使用更加廣闊∫巹?；蛘哂?5% SDS 或者 8M 尿素幫助溶解蛋白沉淀后做蛋白定量提高。如果需要 BCA 蛋白定量可能需要把 8M 尿素稀釋到 3M。
22. 95℃放置 5 min 溶解和變性蛋白進入當下，回復到室溫紮實，最高速離心 1 min，取上清進行 SDS-PAGE 電泳或者 western blot 等試驗新體系。
與 RNA 相關的產(chǎn)品：
71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）
71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）
71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有qPCR儀)
與 miRNA 相關的產(chǎn)品：
71418-25 Script III miRNA 1st Stand Synthesis Kit（加尾法）
71419-500 Script III miRNA Real-Time PCR Assay kit（for qPCR投入力度，加尾法）
71613-500 Script III miRNA RT-qPCR Detection kit（71418-25 + 71419-500）
動物組織/細胞RNA/ DNA共提試劑盒 核酸提取
