2×LongHiFi PCR Master Mix(含染料)PCR相關
2× LongHiFi PCR Mix為多種采用zui xian進基因工程改造而來的超保真酶添加延伸因子混合而成改造層面，極大的提高了擴增長度總之、擴增速度至關重要、保真性和產量增幅最大。2× LongHiFi PCR Mix是長片段空白區、超保真進一步提升、快速擴增的shou選產品空間廣闊。2×LongHiFi PCR Master Mix(含染料)PCR相關
2× LongHiFi PCR Master Mix (含染料)
2×LongHiFi PCR Master Mix(含染料)PCR相關
目錄號:71814
產品內容
產品成份 | 71814-05 | 71814-0100 |
2× LongHiFi PCR Master Mix | 5× 1 ml | 100× 1 ml |
保存條件
-20℃保存，有效期 2 年系統。
經(jīng)常使用增強，可置于 4 °C 保存，有效期 3 個月交流等。
產品簡介
2× LongHiFi PCR Mix為多種采用zui xian進基因工程改造而來的超保真酶添加延伸因子混合而成更加廣闊，極大的提高了擴增長度、擴增速度提高、保真性和產量可以使用。2× LongHiFi PCR Mix是長片段、超保真紮實、快速擴增的shou選產品效高化。
PCR產物為平末端，不需要加A頭進行培訓，可直接用Blunt平末端系列載體克隆發展機遇。
本產品包含LongHiFi DNA Polymerase、dNTPs和優(yōu)化的反應緩沖液法治力量，濃度為2×全技術方案。使用時，只需加入模板共享、引物信息化，并補足水至Mix終濃度為1×即可。
本制品含紅色示蹤染料生動，不需添加上樣緩沖液即可直接上樣進行電泳新型儲能；也可經(jīng)過純化處理，以用于酶切新品技、連接範圍、熒光測序等后續(xù)操作。
產品特點
1. 高產：一般 PCR 產物量比傳統(tǒng)產量高 50%-100%紮實做！
2. 高效：延伸速度可以達到 3-4kb/min空間廣闊，是 pfu 的 6-8 倍！
3. 高成功率：對于高 GC 模板和特殊結構的復雜模板有良好效果！
4. 超高保真：保真度是 taq 的 81 倍以上服務品質。
5. 擴增長度長：以復雜基因組 DNA 為模板擴增可達 10kb的發生，以簡單基因組、質粒和噬菌體 DNA 為模板擴增可達 15kb集成。
2 × LongHiFi PCR Master Mix 使用說明：
一重要手段、配制 PCR 反應體系：(于冰上配制)
Component | 20 μl Reaction | 50 μl Reaction | 終濃度 |
2× LongHiFi PCR Mix | 10 μl | 25 μl | 1 × |
Forward Primer (10 μM) | 0.4 μl | 1 μl | 0.2 μM |
Reverse Primer (10 μM) | 0.4 μl | 1 μl | 0.2 μM |
Template DNA | as required | as required | |
ddH2O | up to 20 μl | up to 50 μl |
參考模板用量：（以 50 μl 反應體系為例）
質粒：0.1-10 ng；
細菌基因組：10-100 ng穩定性；
人類基因組：50-150 ng像一棵樹；
cDNA：1-5 μl from RT。
注意：實際操作中去突破，首先要計算好需要補加 ddH2O 的量以后全面協議，建議先加水，然后按上述順序添加其它成分具體而言，最后加 LongHiFi PCR Mix，瞬離智慧與合力，上機喜愛。
二、設置 PCR 循環(huán)條件：（請根據(jù)實際情況適當調整）
Step | Temperature | Time | Cycle Number |
Initial denaturation | 94℃ | 3 minutes | |
Denaturation | 94℃ | 10 seconds | 30-35 cycles |
Annealing | 50-60℃ | 10-15 seconds | |
Extension | 72℃ | 15-20 seconds /kb | |
Final Extension | 72℃ | 5 minutes | |
4-8℃ | Hold |
注意：一般情況下開放要求，Annealing Temperature = Tm - 5°C
1. 質粒和簡單基因組等簡單模板向好態勢，可以采用 10-15 sec/kb；復雜模板 ( 如人類基因組 DNA )服務機製，可以采用 20-25 sec/kb貢獻力量。
2. 對于高 GC 含量的模板，預變性和變性溫度可以提高到 98℃大幅拓展。
3. 如果電泳發(fā)現(xiàn)主帶上下拖尾模糊現(xiàn)象發行速度，或者泳道出現(xiàn)從上樣孔拖下來的涂抹帶現(xiàn)象，一般提示延伸時間過長與時俱進，梯度縮短延伸時間（建議 10-15sec/kb 為梯度減少延伸時間）直到獲得滿意結果性能。
三、結果檢測：反應結束后取 5 µl 反應產物綜合運用，瓊脂糖凝膠電泳檢測供給。
2×LongHiFi PCR Master Mix(含染料)PCR相關
