Universal SYBR Green qPCR Mix熒光定量
2× Universal SYBR Green qPCR Mix是SYBR Green I嵌合染料法專用的qPCR試劑首要任務，為2x預(yù)混液市場開拓，包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分開放要求，可減少操作步驟基本情況，縮短加樣時(shí)間帶動擴大，降低污染幾率穩定。Universal SYBR Green qPCR Mix熒光定量
2 x Universal SYBR Green qPCR Mix
Universal SYBR Green qPCR Mix熒光定量
目錄號(hào):71600
產(chǎn)品內(nèi)容
Components | 71600-500 500 rxns (20 μl/rxn) | 71600-2500 2500 rxns(20μl/rxn) |
2x Universal SYBR GreenqPCRMix | 1 ml x5 | 1 ml x25 |
保存條件
-20℃保存改造層面，有效期 24 個(gè)月。使用前優勢與挑戰，充分融解經驗分享，輕輕顛倒混勻，短期使用可放在4℃趨勢，避免反復(fù)凍融有力扭轉。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
2× Universal SYBR Green qPCR Mix是SYBR Green I嵌合染料法專用的qPCR試劑，為2x預(yù)混液一站式服務，包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分廣度和深度，可減少操作步驟，縮短加樣時(shí)間引領作用，降低污染幾率加強宣傳。其核心組分是全新的Hotmaster Taq DNA聚合酶臺上與臺下，配合精心優(yōu)化的Buffer體系，有效抑制非特異性擴(kuò)增技術發展，可對(duì)寬廣濃度范圍的模板進(jìn)行準(zhǔn)確定量集聚效應，獲得穩(wěn)定可靠的qPCR結(jié)果，具有靈敏度高自主研發、特異性強(qiáng)應用、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)。
預(yù)混液中含有通用型ROX品率，適用于所有qPCR儀相貫通，使用qPCR Mix時(shí)不需要額外添加ROX來校正儀器。
操作步驟：
1. 將DNA模板積極影響、引物自動化方案、2 x Universal SYBR Green qPCR Mix、RNase-Free H2O溶解并置于冰上備用越來越重要。
2. 冰上配制qPCR反應(yīng)體系：（以20μl反應(yīng)體系為例）
Components | Volume (20μl) | Final Concentration |
2 x Universal SYBR Green qPCR Mix | 10 μl | 1× |
DNA Template | Variable | As required |
Forward Primer (10μM) | 0.4 μl | 0.2 μM each |
Reverse Primer (10μM) | 0.4 μl | 0.2 μM each |
RNase free H2O | Up to 20 μl | Not applicable |
注意：
1） 推薦模板加樣量為1-2μl / 20μl反應(yīng)體系線上線下，cDNA原液≤總反應(yīng)體系的10%，基因組DNA的量為10-100 ng醒悟。因不同種類的DNA模板中含有的靶基因拷貝數(shù)不同數據顯示，可對(duì)模板進(jìn)行梯度稀釋，以確定最佳的模板使用量也逐步提升。
2） 通常推薦引物濃度為0.2 μM記得牢，就可以得到較好的結(jié)果，反應(yīng)效果不佳時(shí)可在0.1 - 1.0 μM范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整重要的作用。擴(kuò)增效率不高的情況下更多可能性，可提高引物濃度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)足夠的實力，可降低引物濃度緊迫性，由此優(yōu)化反應(yīng)體系。
3. qPCR反應(yīng)程序
注意：
1） 本產(chǎn)品兼容性強(qiáng)更適合，絕大多數(shù)情況下使用二步法和三步法均可獲得良好效果高效。一般來說，二步法擴(kuò)增特異性高要素配置改革，三步法擴(kuò)增效率高體系。如果融鏈曲線較差，可以嘗試兩步法擴(kuò)增或提高退火溫度核心技術體系；如果因使用Tm值較低的引物等原因開拓創新，得不到良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，可嘗試加長(zhǎng)延伸時(shí)間或者進(jìn)行三步法PCR擴(kuò)增。
2） 根據(jù)引物的Tm值進(jìn)行退火&延伸（退火）溫度的設(shè)定主動性；
3） 延伸（退火&延伸）時(shí)間的設(shè)置還需要根據(jù)您所使用的qPCR儀所需要的最短數(shù)據(jù)采集時(shí)間自行調(diào)整創造性。
4） 融解曲線分析請(qǐng)以所使用的熒光定量PCR儀推薦的程序進(jìn)行設(shè)定。
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