2x SYBR Green qPCR Mix(NO ROX)熒光定量
2x SYBR Green qPCR Mix是SYBR Green I 嵌合染料法專用的qPCR試劑,為2x 預混液流程,包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分合作,可減少操作步驟,縮短加樣時間助力各業,降低污染幾率極致用戶體驗。2x SYBR Green qPCR Mix(NO ROX)熒光定量
2x SYBR Green qPCR Mix(NO ROX)
2x SYBR Green qPCR Mix(NO ROX)熒光定量
目錄號:71313
產(chǎn)品內(nèi)容
Components | 71313-500 500 rxns (20 μl/rxn) | 71313-2500 2500 rxns (20 μl/rxn) |
2x SYBR Green qPCR Mix | 1.25 ml x4 | 1.25 ml x20 |
RNase-Free H2O | 5 ml | 5 ml x5 |
保存條件
-20℃保存,有效期24個月深入交流。使用前引領作用,充分融解,輕柔顛倒混勻,短期使用可放在 4 ℃用的舒心,避免反復凍融技術發展。
產(chǎn)品簡介
2x SYBR Green qPCR Mix是SYBR Green I 嵌合染料法專用的qPCR試劑,為2x 預混液集成,包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分重要手段,可減少操作步驟,縮短加樣時間穩定性,降低污染幾率像一棵樹。其核心組分是全新的Hotmaster Taq DNA聚合酶,配合精心優(yōu)化的Buffer體系去突破,有效抑制非特異性擴增能運用,可對寬廣濃度范圍的模板進行準確定量,獲得穩(wěn)定可靠的qPCR結(jié)果智能設備,具有靈敏度高不可缺少、特異性強、穩(wěn)定性好等特點特點。
本品不含參比染料ROX積極回應,適用于不需要ROX校準的儀器,常見的是Bio-rad系列又進了一步、Roche多種場景、國產(chǎn)qPCR儀。
操作步驟:
1. 將DNA模板規劃、引物擴大公共數據、2 x SYBR qPCR Mix、RNase-Free H2O溶解并置于冰上備用去創新。
2. 冰上配制qPCR反應體系:(以20μl反應體系為例)
Components | Volume (20μl) | Final Concentration |
2x SYBR Green qPCR Mix | 10 μl | 1× |
DNA Template | Variable | As required |
Forward Primer (10μM) | 0.4 μl | 0.2 μM each |
Reverse Primer (10μM) | 0.4 μl | 0.2 μM each |
RNase-Free H2O | Up to 20 μl | Not applicable |
注意:
1) 推薦模板加樣量為1-2μl / 20μl反應體系足夠的實力,cDNA原液≤總反應體系的10%緊迫性,基因組DNA的量為10-100 ng結構。因不同種類的DNA模板中含有的靶基因拷貝數(shù)不同,可對模板進行梯度稀釋高效,以確定最佳的模板使用量溝通協調。
2) 通常推薦引物濃度為0.2 μM,就可以得到較好的結(jié)果體系,反應效果不佳時可在0.1 - 1.0 μM范圍內(nèi)進行調(diào)整保障性。擴增效率不高的情況下,可提高引物濃度責任製;發(fā)生非特異性反應時十分落實,可降低引物濃度,由此優(yōu)化反應體系。
3. qPCR反應程序
注意:
1) 本產(chǎn)品兼容性強製造業,適用于不同廠家優化服務策略、型號的熒光定量PCR儀,絕大多數(shù)情況下使用二步法和三步法均可獲得良好效果發展基礎。建議采用兩步法qPCR反應程序兩個角度入手。一般來說,二步法擴增特異性高同期,三步法擴增效率高生產效率。如果融鏈曲線較差,可以嘗試兩步法擴增或提高退火溫度效果;如果因使用Tm值較低的引物等原因使用,得不到良好的實驗結(jié)果時,可嘗試加長延伸時間或者進行三步法PCR擴增密度增加。
2) 根據(jù)引物的Tm值進行退火&延伸(退火)溫度的設(shè)定基本情況;
3) 延伸(退火&延伸)時間的設(shè)置還需要根據(jù)您所使用的qPCR儀所需要的最短數(shù)據(jù)采集時間自行調(diào)整。
4) 融解曲線分析請以所使用的熒光定量PCR儀推薦的程序進行設(shè)定高端化。
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