2 x SYBR Green qPCR Mix 熒光定量
2x SYBR Green qPCR Mix (High ROX) 是SYBR Green I 嵌合染料法專用的qPCR試劑更加堅強，為2x 預(yù)混液使用，包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分示範推廣，可減少操作步驟集中展示，縮短加樣時(shí)間模式，降低污染幾率參與能力。2 x SYBR Green qPCR Mix 熒光定量
2x SYBR Green qPCR Mix (High ROX)
2 x SYBR Green qPCR Mix 熒光定量
目錄號(hào):71611
產(chǎn)品內(nèi)容
Components | 71611-500 500rxns(20μl/rxn) | 71611-2500 2500rxns(20μl/rxn) |
2x SYBR Green qPCR Mix (High ROX) | 1.25 ml x4 | 1.25 ml x20 |
RNase-Free H2O | 5 ml | 5 ml x5 |
保存條件
-20℃保存合理需求，有效期 24 個(gè)月。使用前充分發揮，充分融解高質量，輕輕顛倒混勻，短期使用可放在 4 ℃選擇適用，避免反復(fù)凍融管理。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
2x SYBR Green qPCR Mix (High ROX) 是SYBR Green I 嵌合染料法專用的qPCR試劑，為2x 預(yù)混液，包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分改進措施，可減少操作步驟就此掀開，縮短加樣時(shí)間，降低污染幾率今年。其核心組分是全新的Hotmaster Taq DNA聚合酶信息化技術，配合精心優(yōu)化的Buffer體系，有效抑制非特異性擴(kuò)增數據，可對(duì)寬廣濃度范圍的模板進(jìn)行準(zhǔn)確定量創新的技術，獲得穩(wěn)定可靠的qPCR結(jié)果，具有靈敏度高顯著、特異性強(qiáng)快速增長、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)。
預(yù)混液中已加入高濃度的ROX參比染料占，適用于ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT and 7900HT Fast,ABI Step One, ABI Step One Plus以及其它需要高濃度ROX機(jī)型高質量。
操作步驟：
1. 將DNA模板、引物激發創作、2x SYBR Green qPCR Mix (High ROX)前景、RNase-Free H2O溶解并置于冰上備用。
2. 冰上配制qPCR反應(yīng)體系：（以20μl反應(yīng)體系為例）
Components | Volume (20μl) | Final Concentration |
2x SYBR Green qPCR Mix (High ROX) | 10 μl | 1× |
DNA Template | Variable | As required |
Forward Primer (10μM) | 0.4 μl | 0.2 μM each |
Reverse Primer (10μM) | 0.4 μl | 0.2 μM each |
RNase free H2O | Up to 20 μl | Not applicable |
1） 推薦模板加樣量為1-2μl / 20μl反應(yīng)體系增幅最大，cDNA原液≤總反應(yīng)體系的10%共享應用，基因組DNA的量為10-100 ng。因不同種類的DNA模板中含有的靶基因拷貝數(shù)不同標準，可對(duì)模板進(jìn)行梯度稀釋示範推廣，以確定最佳的模板使用量。
2） 通常推薦引物濃度為0.2 μM即將展開，就可以得到較好的結(jié)果大幅增加，反應(yīng)效果不佳時(shí)可在0.1 - 1.0 μM范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整。擴(kuò)增效率不高的情況下傳承，可提高引物濃度等特點；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)，可降低引物濃度多種，由此優(yōu)化反應(yīng)體系將進一步。
3. qPCR反應(yīng)程序
注意：
1） 絕大多數(shù)情況下使用二步法和三步法均可獲得良好效果。建議采用兩步法qPCR反應(yīng)程序日漸深入。一般來說動力，二步法擴(kuò)增特異性高，三步法擴(kuò)增效率高互動式宣講。如果融鏈曲線較差效高性，可以嘗試兩步法擴(kuò)增或提高退火溫度模式；如果因使用Tm值較低的引物等原因，得不到良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)提升，可嘗試加長(zhǎng)延伸時(shí)間或者進(jìn)行三步法PCR擴(kuò)增發揮重要帶動作用。
2） 根據(jù)引物的Tm值進(jìn)行退火&延伸（退火）溫度的設(shè)定；
3） 延伸（退火&延伸）時(shí)間的設(shè)置還需要根據(jù)您所使用的qPCR儀所需要的最短數(shù)據(jù)采集時(shí)間自行調(diào)整意料之外。
4） 融解曲線分析請(qǐng)以所使用的熒光定量PCR儀推薦的程序進(jìn)行設(shè)定文化價值。
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