2×Universal probe qPCR Mix(UDG+)熒光定量
2x Universal Probe qPCR Mix(UDG+)是探針法專用的qPCR試劑示範推廣，為2x預(yù)混液更優美，試劑中引入了dNTP/UDG防污染系統(tǒng)的特點，可消除擴(kuò)增產(chǎn)物污染對(duì)qPCR的影響規模。適用于DNA或cDNA的靶序列檢測(cè)不要畏懼、基因表達(dá)分析長足發展、拷貝數(shù)分析今年、SNP分型等。2×Universal probe qPCR Mix(UDG+)熒光定量
2x Universal Probe qPCR Mix (UDG+)
2×Universal probe qPCR Mix(UDG+)熒光定量
目錄號(hào)：71400
產(chǎn)品內(nèi)容
Components | 71400-500 500 rxns(20μl/rxn) | 71400-2500 2500rxns(20μl/rxn) |
2x Universal Probe qPCR Mix (UDG+) | 1.25 ml x4 | 1.25 ml x20 |
RNase-Free H2O | 5 ml | 5 ml x5 |
保存條件
-20℃保存結構不合理，有效期24個(gè)月動手能力。使用前逐步改善，充分融解，輕輕顛倒混勻提升，短期使用可放在4℃大大提高，避免反復(fù)凍融。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
2x Universal Probe qPCR Mix(UDG+)是探針法專用的qPCR試劑研究成果，為2x預(yù)混液取得了一定進展，試劑中引入了dNTP/UDG防污染系統(tǒng)，可消除擴(kuò)增產(chǎn)物污染對(duì)qPCR的影響首次。適用于DNA或cDNA的靶序列檢測(cè)可能性更大、基因表達(dá)分析、拷貝數(shù)分析搖籃、SNP分型等技術。
其核心組分是全新的Hotmaster Taq DNA聚合酶，配合精心優(yōu)化的Buffer體系推動，有效抑制非特異性擴(kuò)增相對較高，可對(duì)寬廣濃度范圍的模板進(jìn)行準(zhǔn)確定量，獲得穩(wěn)定可靠的qPCR結(jié)果信息，具有靈敏度高相關、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)豐富內涵。
預(yù)混液中已添加有通用型ROX生產效率，適用于各種qPCR儀，使用時(shí)不需要額外添加ROX來(lái)校正儀器適應性。
操作步驟：
1. 將DNA模板節點、引物、探針發展成就、2 x Universal Probe qPCR Mix成就、RNase-Free H2O溶解并置于冰上備用。
2. 冰上配制qPCR反應(yīng)體系：（以20μl反應(yīng)體系為例）
Components | Volume (20μl) | Final Concentration |
2 x Universal Probe qPCR Mix (UDG+) | 10 μl | 1× |
DNA Template | Variable | As required |
Forward Primer (10μM) | 0.5 μl | 0.25 μM each |
Reverse Primer (10μM) | 0.5 μl | 0.25 μM each |
Probe (10μM) | 0.5 μl | 0.25 μM each |
RNase free H2O | Up to 20 μl | Not applicable |
1） 推薦模板加樣量為1-2μl / 20μl反應(yīng)體系開展面對面，cDNA原液≤總反應(yīng)體系的10%系統，基因組DNA的量為10-100 ng。因不同種類的DNA模板中含有的靶基因拷貝數(shù)不同進一步提升，可對(duì)模板進(jìn)行梯度稀釋空間廣闊，以確定最佳的模板使用量。
2） 通常引物濃度為0.25 μM改革創新，就可以得到較好的結(jié)果支撐能力，反應(yīng)效果不佳時(shí)可在0.1 - 1.0 μM范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整。擴(kuò)增效率不高的情況下，可提高引物濃度特征更加明顯；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)估算，可降低引物濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系的可能性。
3. qPCR反應(yīng)程序
注意：
1） 本產(chǎn)品兼容性強(qiáng)不要畏懼，絕大多數(shù)情況下使用二步法和三步法均可獲得良好效果。一般來(lái)說(shuō)問題，二步法擴(kuò)增特異性高逐漸顯現，三步法擴(kuò)增效率高。如果融鏈曲線較差系統穩定性，可以嘗試兩步法擴(kuò)增或提高退火溫度拓展基地；如果因使用Tm值較低的引物等原因，得不到良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)實力增強，可嘗試加長(zhǎng)延伸時(shí)間或者進(jìn)行三步法PCR擴(kuò)增體系流動性。
2） 根據(jù)引物的Tm值進(jìn)行退火&延伸（退火）溫度的設(shè)定；
3） 延伸（退火&延伸）時(shí)間的設(shè)置還需要根據(jù)您所使用的qPCR儀所需要的最短數(shù)據(jù)采集時(shí)間自行調(diào)整帶來全新智能。
4） 融解曲線分析請(qǐng)以所使用的熒光定量PCR儀推薦的程序進(jìn)行設(shè)定實現了超越。
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