TOPO-Blunt Lightning Cloning Kit-現(xiàn)貨
可在室溫條件下等地，20分鐘完成TA克隆或Blunt克隆效率，陽(yáng)性率接近100%品牌，并且免冰浴產品和服務、免熱激發力、免藍(lán)白斑篩選意料之外，還可以連接長(zhǎng)達(dá)10kb的DNA片段文化價值。TOPO-Blunt Lightning Cloning Kit-現(xiàn)貨
TOPO-Blunt Lightning Cloning Kit（含酶切位點(diǎn)）
TOPO-Blunt Lightning Cloning Kit-現(xiàn)貨
目錄號(hào)：42116
產(chǎn)品內(nèi)容：
產(chǎn)品成份 | 42116-20 (20 rxn) | 42116-80（80 rxn） |
pTOPO-TA/Blunt Vector(30ng/ul) | 20 ul | 80 ul |
1000bp Control (30ng/ul) | 5 ul | 5 ul |
10x Enhancer | 20 ul | 80 ul |
保存條件：
-20℃，存放 12 個(gè)月置之不顧，不影響使用效果不斷完善。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
可在室溫條件下數字化，20分鐘完成TA克隆或Blunt克隆，陽(yáng)性率接近100%基礎上，并且免冰浴各領域、免熱激、免藍(lán)白斑篩選保持競爭優勢，還可以連接長(zhǎng)達(dá)10kb的DNA片段進行培訓。
克隆步驟（≤3kb 片段）： 簡(jiǎn)化步驟（≤10kb 片段）-- 免復(fù)蘇，免液體 LB
1長效機製、連接：室溫 5 分鐘物聯與互聯； 1、連接: 37℃連接 5 min進入當下。
2紮實、轉(zhuǎn)化：室溫 5 分鐘； 2新體系、轉(zhuǎn)化：冰浴 5 min投入力度，42℃熱激 1 min，冰上 2 min不難發現。
3貢獻法治、復(fù)蘇：180rpm、37℃振蕩培養(yǎng) 10 分鐘發展需要；涂板攻堅克難。 3、取全部菌液涂板顯示，37℃倒置培養(yǎng)雙向互動。
操作步驟：
1. PCR 產(chǎn)物的制備：
a. 引物要求：引物不能磷酸化。
b. 酶的選擇：根據(jù)需要選擇DNA 聚合酶設計能力，該載體兼容PCR 產(chǎn)物的A 末端和平末端品牌。
c. 電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物的量和質(zhì)量：
①僅有目的條帶，可直接進(jìn)行連接反應(yīng)更為一致，無(wú)需純化等形式；
②如果有多條帶，建議凝膠回收 DNA 片段（DC011-100）;
③如果以質(zhì)粒為模板的擴(kuò)增研究與應用，則必須進(jìn)行凝膠回收飛躍，因?yàn)槟０遒|(zhì)粒也會(huì)長(zhǎng)出非目的菌落。
2. 連接反應(yīng)：
1）室溫（20℃-37℃）建立連接體系（10ul 體系）：
純化后的 PCR 產(chǎn)物 | 0.5-8ul |
pTOPO-TA/blunt Vector | 1ul |
10 ? Enhancer | 1 ul |
滅菌水 | X ul |
總體積 | 10 ul |
不同大小插入片段的推薦用量：
插入片段大腥鎱f議。╞p） | 最佳用量（ng） |
100-1000 | 10-40 |
1000-2000 | 40-80 |
2000-5000 | 80-150 |
加完試劑后重要部署，輕彈管底混勻（或輕輕吹打混勻），點(diǎn)甩離心收集所有液體在離心管底。
2) 室溫（20℃-37℃）連接 5 分鐘的過程中。連接產(chǎn)物可直接轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞發展契機，或置于冰上備用。
3. 轉(zhuǎn)化促進進步、復(fù)蘇、涂板：
1）100ul 感受態(tài)細(xì)胞優勢領先，置于室溫解凍（約 1 分鐘左右）達到，輕撣幾次將細(xì)胞均勻懸浮。
2） 加入 10ul 連接液不可缺少，輕輕混勻蓬勃發展，室溫（20℃-37℃）放置 5 分鐘。
3） 加入 500ul 平衡至室溫的 LB 或者 SOC 培養(yǎng)基(不含抗生素)積極回應，37℃ 180 rpm 振蕩培養(yǎng) 10 min重要性。
（注意：大于 3kb 的片段，振蕩培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)至 30-60 分鐘多種場景，可以增加轉(zhuǎn)化子多元化服務體系。或者用簡(jiǎn)化步驟）
4） 取 200?l 菌液涂板(含氨芐青霉su 50-100ug/ml）擴大公共數據，培養(yǎng)過(guò)夜深度。（為得到較多克隆，4000 rpm 離心 1 min核心技術體系，吸棄掉部分上清開拓創新，保留 100-150ul，輕彈懸浮菌體必然趨勢，取全部菌液涂板）
注意：如果使用 5ul 體系促進善治，各成分按照比例減半，使用次數(shù)可以加倍多樣性。
4. 轉(zhuǎn)化子的篩選鑒定：
本制品陽(yáng)性率相當(dāng)高發揮效力，一般情況下，可以達(dá)到所見(jiàn)即所得落到實處，只要是長(zhǎng)出來(lái)的菌落正常（不是污染的雜菌服務水平，轉(zhuǎn)化子數(shù)量也不算太少），基本就包含插入技術創新。因此插入片段不超過(guò) 2-3kb 的情況下可以不用鑒定直接挑 1-2 個(gè)菌去測(cè)序處理方法。
1） 菌落 PCR 檢測(cè)：挑單菌落于 10ul 無(wú)菌水中，混勻持續向好，取 1ul 置于 25ul PCR 體系,用 PCR 引物或者M(jìn)13 通用引物去鑒定陽(yáng)性克隆習慣。
2）用通用 M13F（-20）/M13R（-26）引物測(cè)序來(lái)確定是否含有目的克隆。
TOPO-Blunt Lightning Cloning Kit-現(xiàn)貨
