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TOPO-TA/Blunt Simple Lightning Cloning Kit-

• 型   號：42212
• 價   格：
• 更新時間：2025-04-23
• 廠家性質(zhì)：經(jīng)銷商

可在室溫條件下製度保障，20分鐘完成TA克隆或Blunt克隆，陽性率接近100%自主研發，并且免冰浴、免熱激、免藍白斑篩選適應能力，還可以連接長達10kb的DNA片段。
TOPO-TA/Blunt Simple Lightning Cloning Kit-

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TOPO-TA Blunt Simple Lightning Cloning Kit

TOPO-TA/Blunt Simple Lightning Cloning Kit-

目錄號：42212

產(chǎn)品內(nèi)容：

保存條件：

-20℃各方面，存放 12 個月防控，不影響使用效果。

產(chǎn)品簡介：

可在室溫條件下善謀新篇，20分鐘完成TA克隆或Blunt克隆增產，陽性率接近100%，并且免冰浴方法、免熱激行動力、免藍白斑篩選，還可以連接長達10kb的DNA片段切實把製度。

克隆步驟（≤3kb 片段）：                 簡化步驟（≤10kb 片段） 免復蘇保供，免液體 LB

1、連接：室溫 5 分鐘協同控製；                        1振奮起來、連接: 37℃連接 5 min。

2利用好、轉(zhuǎn)化：室溫 5 分鐘深入各系統；                        2、轉(zhuǎn)化：冰浴 5 min系列，42℃熱激 1 min作用，冰上 2 min。

3慢體驗、復蘇：180rpm著力增加、37℃振蕩培養(yǎng) 10 分鐘；涂板。 3處理、取全部菌液涂板建設，37℃倒置培養(yǎng)。

操作步驟：

1.         PCR 產(chǎn)物的制備：

a.       引物要求：引物不能磷酸化助力各行。

b.     酶的選擇：根據(jù)需要選擇DNA 聚合酶前來體驗，該載體兼容PCR 產(chǎn)物的A 末端和平末端。

c.        電泳檢測 PCR 產(chǎn)物的量和質(zhì)量：

①僅有目的條帶確定性，可直接進行連接反應更加廣闊，無需純化；

②如果有多條帶講故事，建議凝膠回收 DNA 片段（DC011-100）;

③如果以質(zhì)粒為模板的擴增非常完善，則必須進行凝膠回收，因為模板質(zhì)粒也會長出非目的菌落全面革新。

2.         連接反應：

1） 室溫（20℃-37℃）建立連接體系（10ul 體系）：

不同大小插入片段的推薦用量：

加完試劑后，輕彈管底混勻（或輕輕吹打混勻）效率，點甩離心收集所有液體在離心管底規模。

2) 室溫（20℃-37℃）連接 5 分鐘。連接產(chǎn)物可直接轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞講道理，或置于冰上備用發展目標奮鬥。

3.         轉(zhuǎn)化、復蘇更多的合作機會、涂板：

1）100ul 感受態(tài)細胞延伸，置于室溫解凍（約 1 分鐘左右），輕撣幾次將細胞均勻懸浮服務好。

2）     加入 10ul 連接液新趨勢，輕輕混勻，室溫（20℃-37℃）放置 5 分鐘共謀發展。

3）      加入 500ul 平衡至室溫的 LB 或者 SOC 培養(yǎng)基(不含抗生素)學習，37℃ 180 rpm 振蕩培養(yǎng) 10 min。

（注意：大于 3kb 的片段聽得懂，振蕩培養(yǎng)時間延長至 30-60 分鐘應用優勢，可以增加轉(zhuǎn)化子∪轿?；蛘哂煤喕襟E）

4）        取 200?l 菌液涂板(含氨芐青霉su 50-100ug/ml）高效節能，培養(yǎng)過夜。（為得到較多克隆大局，4000 rpm 離心 1 min新創新即將到來，吸棄掉部分上清邁出了重要的一步，保留 100-150ul，輕彈懸浮菌體設施，取全部菌液涂板）

注意：如果使用 5ul 體系需求，各成分按照比例減半，使用次數(shù)可以加倍規模設備。

4.         轉(zhuǎn)化子的篩選鑒定：

本制品陽性率相當高真諦所在，一般情況下指導，可以達到所見即所得競爭力，只要是長出來的菌落正常（不是污染的雜菌，轉(zhuǎn)化子數(shù)量也不算太少）資料，基本就包含插入廣泛應用。因此插入片段不超過 2-3kb 的情況下可以不用鑒定直接挑 1-2 個菌去測序。

1）  菌落 PCR 檢測：挑單菌落于 10ul 無菌水中橫向協同，混勻哪些領域，取 1ul 置于 25ul PCR 體系,用 PCR 引物或者M13 通用引物去鑒定陽性克隆。

2）用通用 M13F（-20）/M13R（-26）引物測序來確定是否含有目的克隆不斷創新。

TOPO-TA/Blunt Simple Lightning Cloning Kit-